Μελέτη κόλαφος για τα «τσιμπήματα»: Καταστολή του έμφυτου ανοσοποιητικού από τους εμβολιασμούς με σκευάσματα mRNA κατά του SARS-CoV-2. Ο ρόλος των δομών τετραπλής έλικας, των εξωσωμάτων και των microRNA - Ελλήνων Αφύπνιση

Page Nav

HIDE

Grid

GRID_STYLE
{fbt_classic_header}

ΕΠΙΚΑΙΡΟΤΗΤΑ:

latest

Μελέτη κόλαφος για τα «τσιμπήματα»: Καταστολή του έμφυτου ανοσοποιητικού από τους εμβολιασμούς με σκευάσματα mRNA κατά του SARS-CoV-2. Ο ρόλος των δομών τετραπλής έλικας, των εξωσωμάτων και των microRNA

  «Τα εμβόλια mRNA προάγουν τη παρατεταμένη σύνθεση της πρωτεΐνης ακίδας του SARS-CoV-2 που είναι νευροτοξική και βλάπτει τους μηχανισμούς...

 


«Τα εμβόλια mRNA προάγουν τη παρατεταμένη σύνθεση της πρωτεΐνης ακίδας του SARS-CoV-2 που είναι νευροτοξική και βλάπτει τους μηχανισμούς επιδιόρθωσης του DNA. Η καταστολή των αποκρίσεων ιντερφερόνης τύπου Ι οδηγεί σε εξασθενημένη έμφυτη ανοσία. Τα εμβόλια mRNA δυνητικά προκαλούν αυξημένο κίνδυνο για μολυσματικές ασθένειες και καρκίνο. Η βελτιστοποίηση κωδικονίων οδηγεί σε mRNA πλούσιο σε G που έχει απρόβλεπτα πολύπλοκα αποτελέσματα.»


«Δισεκατομμύρια ζωές κινδυνεύουν δυνητικά, δεδομένου του μεγάλου αριθμού ατόμων που εμβολιάζονται με τα mRNA εμβόλια κατά του sars-CoV-2 και του ευρύτατου φάσματος ανεπιθύμητων ενεργειών που περιγράφουμε. Καλούμε τους οργανισμούς δημόσιας υγείας να αποδείξουν με στοιχεία, γιατί τα θέματα που συζητούνται σε αυτό το έγγραφο δεν είναι καίριας σημασίας για τη δημόσια υγεία ή επιτέλους να αναγνωρίσουν ότι είναι και να ενεργήσουν αναλόγως.»

 

Πηγή: sciencedirect.com

Απόδοση: Ελλήνων Αφύπνιση

 

Μια μελέτη που την υπογράφουν οι επιστήμονες-ερευνητές Stephanie Seneff, Greg Nigh, Anthony M. Kyriakopoulos, Peter A. McCullough, τινάζει στον αέρα ολόκληρο το αφήγημα αποτελεσματικότητας και ασφάλειας των εμβολίων κατά του Covid-19, τα οποία χορηγήθηκαν εξαναγκαστικά και μαζικά σε δισσεκατομύρια ανθρώπους.

Η μελέτη δημοσιεύθηκε στο Science Direct το οποίο είναι ιστότοπος που παρέχει πρόσβαση σε μια μεγάλη βιβλιογραφική βάση δεδομένων επιστημονικών και ιατρικών δημοσιεύσεων.

Οι επιστήμονες, μεταξύ άλλων αναφέρουν πως τα εμβόλια mRNA που κατασκευάζονται από την Pfizer/BioNTech και τη Moderna έχουν θεωρηθεί ως ουσιαστική πτυχή των προσπαθειών μας για τον έλεγχο της εξάπλωσης του COVID-19. Χώρες σε όλο τον κόσμο έχουν προωθήσει επιθετικά μαζικά προγράμματα εμβολιασμού με την ελπίδα ότι τέτοιες προσπάθειες θα μπορούσαν τελικά να περιορίσουν τη συνεχιζόμενη πανδημία και να αποκαταστήσουν την κανονικότητα. Τονίζουν όμως πως οι κυβερνήσεις είναι επιφυλακτικές στο να εξετάσουν την πιθανότητα αυτά τα εμβόλια να προκαλέσουν βλάβη με απροσδόκητους τρόπους, και ιδιαίτερα ότι μια τέτοια βλάβη μπορεί να ξεπεράσει ακόμη και τα οφέλη που επιτυγχάνονται στην προστασία από σοβαρές ασθένειες. Είναι πλέον σαφές ότι τα αντισώματα που προκαλούνται από τα εμβόλια εξασθενούν σε μόλις 3-10 εβδομάδες μετά τη δεύτερη δόση ( Shrotri et al., 2021 ), έτσι ώστε οι άνθρωποι συμβουλεύονται να αναζητούν αναμνηστικά εμβόλια σε τακτά χρονικά διαστήματα...κάτι που όπως καταδεικνύει η μελέτη ενέχει πολλαπλούς κινδύνους για τους οποίους κανένας δεν έχει ενημερωθεί από τους «ειδικούς»!

Ακολουθεί ολόκληρη η μελέτη, σας προτρέπουμε να την διαβάσετε ολόκληρη, κατανοώντας ότι και λόγω μεγέθους ίσως είναι χρονοβόρο:

Περίληψη

Τα εμβόλια mRNA SARS-CoV-2 κυκλοφόρησαν στην αγορά ως απάντηση στις κρίσεις δημόσιας υγείας του Covid-19. Η χρήση εμβολίων mRNA στο πλαίσιο μολυσματικών ασθενειών δεν έχει προηγούμενο. Οι πολλές αλλαγές στο mRNA του εμβολίου κρύβουν το mRNA από τις κυτταρικές άμυνες και προάγουν μεγαλύτερο βιολογικό χρόνο ημιζωής και υψηλή παραγωγή πρωτεΐνης ακίδας. Ωστόσο, η ανοσολογική απόκριση στο εμβόλιο είναι πολύ διαφορετική από αυτή σε μια λοίμωξη SARS-CoV-2. Σε αυτό το άρθρο, παρουσιάζουμε στοιχεία ότι ο εμβολιασμός προκαλεί μια βαθιά έκπτωση στη σηματοδότηση της ιντερφερόνης τύπου Ι , η οποία έχει διάφορες δυσμενείς συνέπειες στην ανθρώπινη υγεία. Τα κύτταρα του ανοσοποιητικού που έχουν προσλάβει τα νανοσωματίδια του εμβολίου απελευθερώνουν στην κυκλοφορία μεγάλο αριθμό εξωσωμάτων που περιέχουν πρωτεΐνη ακίδας μαζί με microRNA που επάγουν μια σηματοδοτική απόκριση στα κύτταρα λήπτες σε απομακρυσμένες θέσεις. Εντοπίζουμε επίσης πιθανές σοβαρές διαταραχές στον ρυθμιστικό έλεγχο της πρωτεϊνοσύνθεσης και στην επιτήρηση του καρκίνου . Αυτές οι διαταραχές δυνητικά έχουν αιτιολογική σύνδεση με νευροεκφυλιστική νόσο , μυοκαρδίτιδα , ανοσοθρομβοπενία,παράλυση Bell, ηπατική νόσο, μειωμένη προσαρμοστική ανοσία, μειωμένη απόκριση βλάβης του DNA και ογκογένεση. Δείχνουμε στοιχεία από τη βάση δεδομένων VAERS που υποστηρίζουν την υπόθεσή μας. Πιστεύουμε ότι μια ολοκληρωμένη αξιολόγηση κινδύνου/οφέλους των εμβολίων mRNA τα αμφισβητεί ως θετικούς παράγοντες που συμβάλλουν στη δημόσια υγεία.

Γραφική απεικόνιση περίληψης





1 . Εισαγωγή

Ο εμβολιασμός είναι μια προσπάθεια χρήσης μη παθογόνου υλικού για τη μίμηση της ανοσολογικής απόκρισης μιας φυσικής μόλυνσης, παρέχοντας έτσι ανοσία σε περίπτωση έκθεσης σε παθογόνο. Αυτός ο στόχος έχει κυρίως επιδιωχθεί μέσω της χρήσης εμβολίων όλου του οργανισμού και εξασθενημένων ιών. Η χρήση θραυσμάτων του ιού ή των πρωτεϊνικών προϊόντων τους, που αναφέρονται ως «εμβόλια υπομονάδας», ήταν τεχνικά πιο δύσκολη ( Bhurani et al., 2018 ). Σε κάθε περίπτωση, μια σιωπηρή υπόθεση πίσω από την ανάπτυξη οποιασδήποτε εκστρατείας εμβολιασμού είναι ότι το εμβόλιο προσδίδει τα αποτελέσματα μιας «καλοήθους λοίμωξης», ενεργοποιώντας το ανοσοποιητικό σύστημα έναντι μελλοντικής έκθεσης, αποφεύγοντας παράλληλα τις επιπτώσεις στην υγεία της πραγματικής μόλυνσης.

Μεγάλο μέρος της βιβλιογραφίας σχετικά με αυτό που σχετίζεται με τον COVID-19 υποδηλώνει ότι η ανοσολογική απόκριση στον εμβολιασμό που βασίζεται σε mRNA είναι παρόμοια με τη φυσική μόλυνση. Μια προεκτυπωτική μελέτη βρήκε «υψηλή ανοσογονικότητα του εμβολίου BNT162b2 σε σύγκριση με τη φυσική μόλυνση». Οι συγγραφείς βρήκαν ότι υπάρχουν πολλές ποιοτικές ομοιότητες αλλά ποσοτικές διαφορές ( Psichogiou et al., 2021a ). Ο Jhaveri (2021) προτείνει ότι τα εμβόλια mRNA κάνουν ό,τι κάνει η μόλυνση με τον ιό: «Η πρωτεΐνη παράγεται και παρουσιάζεται με τον ίδιο τρόπο όπως η φυσική μόλυνση». Το Κέντρο Ελέγχου και Πρόληψης Νοσημάτων των ΗΠΑ (CDC) υποστηρίζει την υπόθεση με βάση τους τίτλους αντισωμάτων που δημιουργήθηκαν από προηγούμενη μόλυνση έναντι εμβολιασμού, εκτός από την παραγωγή κυττάρων Β μνήμης, για να υποστηρίξουν ότι η ανοσολογική απόκριση στον εμβολιασμό είναι ανάλογη με την απόκριση στη φυσική μόλυνση ( Κέντρα Ελέγχου και Πρόληψης Νοσημάτων, 2021α ). Αυτή η ομοιότητα στη χυμική ανοσολογική απόκριση στον εμβολιασμό έναντι της φυσικής μόλυνσης, σε συνδυασμό με δεδομένα δοκιμών και παρατήρησης που καταδεικνύουν μειωμένο κίνδυνο μόλυνσης μετά τον εμβολιασμό, είναι η αιτιολόγηση της εκστρατείας μαζικού εμβολιασμού.

Το έγγραφό μας συνοψίζει την τρέχουσα βιβλιογραφία για το mRNA και τις επιπτώσεις του στη μοριακή βιολογία στα ανθρώπινα κύτταρα. Αναγνωρίζουμε ότι υπάρχει ένα ευρύ φάσμα απόψεων σε αυτήν την εκκολαπτόμενη φάση της τεχνολογίας mRNA. Δεδομένης της ευρείας ανάπτυξής του πριν από τη βασική εργασία σε τόσους πολλούς από τους μηχανισμούς που συζητάμε εδώ, πιστεύουμε ότι το έργο μας είναι σημαντικό για την παροχή μιας ευρείας κατανόησης των παρόντων και των μελλοντικών ανασκοπήσεων που σχετίζονται με την αναπτυσσόμενη προκλινική μοριακή εργασία που γίνεται σε αυτόν τον τομέα.

Σε αυτό το άρθρο, διερευνούμε την επιστημονική βιβλιογραφία που υποδηλώνει ότι ο εμβολιασμός με ένα εμβόλιο mRNA ξεκινά ένα σύνολο βιολογικών γεγονότων που όχι μόνο διαφέρουν από αυτά που προκαλούνται από τη μόλυνση, αλλά είναι κατά πολλούς τρόπους αποδεδειγμένα αντιπαραγωγικά τόσο για τη βραχυπρόθεσμη όσο και για τη μακροπρόθεσμη ανοσολογική ικανότητα και φυσιολογική κυτταρική λειτουργία. Αυτοί οι εμβολιασμοί έχουν πλέον αποδειχθεί ότι μειώνουν τις κρίσιμες οδούς που σχετίζονται με την επιτήρηση του καρκίνου , τον έλεγχο των λοιμώξεων και την κυτταρική ομοιόσταση . Εισάγουν στον οργανισμό πολύ τροποποιημένο γενετικό υλικό. Μια προεκτύπωση έχει αποκαλύψει μια αξιοσημείωτη διαφορά μεταξύ των χαρακτηριστικών της ανοσολογικής απόκρισης σε μια μόλυνση με SARS-CoV-2 σε σύγκριση με την ανοσοαπόκριση σε ένα εμβόλιο mRNA κατά του COVID-19 ( Ivanova et al., 2021). Ανάλυση διαφορικής γονιδιακής έκφρασης των περιφερικών δενδριτικών κυττάρων αποκάλυψε μια δραματική ανοδική ρύθμιση των ιντερφερονών τύπου Ι και τύπου II(IFNs) σε ασθενείς με COVID-19, αλλά όχι σε εμβολιασμένους. Μια αξιοσημείωτη παρατήρηση που έκαναν ήταν ότι υπήρξε επέκταση των κυκλοφορούντων αιμοποιητικών βλαστικών και προγονικών κυττάρων (HSPC) σε ασθενείς με COVID-19, αλλά αυτή η επέκταση απουσίαζε σημαντικά μετά τον εμβολιασμό. Μια εντυπωσιακή επέκταση στους κυκλοφορούντες πλασματοβλάστες που παρατηρήθηκε σε ασθενείς με COVID-19 δεν παρατηρήθηκε επίσης στους εμβολιαζόμενους. Όλες αυτές οι παρατηρήσεις συνάδουν με την ιδέα ότι τα εμβόλια κατά του COVID-19 καταστέλλουν ενεργά τη σηματοδότηση IFN τύπου Ι, όπως θα συζητήσουμε παρακάτω. Σε αυτό το έγγραφο θα επικεντρωθούμε εκτενώς, αν και όχι αποκλειστικά, στην επαγόμενη από τον εμβολιασμό καταστολή της IFN τύπου Ι και στις μυριάδες κατάντη επιδράσεις που έχει αυτό στον σχετικό καταρράκτη σηματοδότησης.

Εφόσον οι μακροχρόνιες προκλινικές δοκιμές και δοκιμές ασφάλειας Φάσης Ι συνδυάστηκαν με δοκιμές Φάσης ΙΙ, στη συνέχεια συνδυάστηκαν οι δοκιμές φάσης ΙΙ και ΙΙΙ ( Kwok, 2021 ). Και δεδομένου ότι ακόμη και αυτά τερματίστηκαν νωρίς και οι ενέσεις με εικονικό φάρμακο, εξετάζουμε το σύστημα φαρμακοεπιτήρησης και τις δημοσιευμένες αναφορές για σήματα ασφαλείας. Κάνοντας αυτό, διαπιστώνουμε ότι αυτά τα στοιχεία δεν είναι ενθαρρυντικά. Η βιολογική απόκριση στον εμβολιασμό με mRNA όπως χρησιμοποιείται επί του παρόντος δεν είναι αποδεδειγμένα παρόμοια με τη φυσική μόλυνση. Σε αυτό το άρθρο θα επεξηγήσουμε αυτές τις διαφορές και θα περιγράψουμε τις ανοσολογικές και παθολογικές διεργασίες που αναμένουμε ότι ξεκινούν από τον εμβολιασμό mRNA. Θα συνδέσουμε αυτές τις υποκείμενες φυσιολογικές επιδράσεις τόσο με συνειδητοποιημένες όσο και με νοσηρότητες που δεν έχουν ακόμη παρατηρηθεί. Αναμένουμε ότι η εφαρμογή αναμνηστικών εμβολιασμών σε ευρεία κλίμακα θα ενισχύσει όλα αυτά τα προβλήματα.

Τα εμβόλια mRNA που κατασκευάζονται από την Pfizer/BioNTech και τη Moderna έχουν θεωρηθεί ως ουσιαστική πτυχή των προσπαθειών μας για τον έλεγχο της εξάπλωσης του COVID-19. Χώρες σε όλο τον κόσμο έχουν προωθήσει επιθετικά μαζικά προγράμματα εμβολιασμού με την ελπίδα ότι τέτοιες προσπάθειες θα μπορούσαν τελικά να περιορίσουν τη συνεχιζόμενη πανδημία και να αποκαταστήσουν την κανονικότητα. Οι κυβερνήσεις είναι επιφυλακτικές στο να εξετάσουν την πιθανότητα αυτές οι ενέσεις να προκαλέσουν βλάβη με απροσδόκητους τρόπους, και ιδιαίτερα ότι μια τέτοια βλάβη μπορεί να ξεπεράσει ακόμη και τα οφέλη που επιτυγχάνονται στην προστασία από σοβαρές ασθένειες. Είναι πλέον σαφές ότι τα αντισώματα που προκαλούνται από τα εμβόλια εξασθενούν σε μόλις 3-10 εβδομάδες μετά τη δεύτερη δόση ( Shrotri et al., 2021 ), έτσι ώστε οι άνθρωποι συμβουλεύονται να αναζητούν αναμνηστικά εμβόλια σε τακτά χρονικά διαστήματα. (Κέντρο Ελέγχου και Πρόληψης Νοσημάτων, 2021β ). Έχει γίνει επίσης προφανές ότι οι ταχέως αναδυόμενες παραλλαγές όπως το Delta και τώρα το στέλεχος Omicron δείχνουν αντίσταση στα αντισώματα που προκαλούνται από τα εμβόλια, μέσω μεταλλάξεων στην πρωτεΐνη ακίδας ( Yahi et al., 2021 ). Επιπλέον, έχει καταστεί σαφές ότι τα εμβόλια δεν αποτρέπουν τη μετάδοση της νόσου, αλλά μπορούν να ισχυριστούν μόνο ότι μειώνουν τη σοβαρότητα των συμπτωμάτων ( Kampf, 2021a ). Μια μελέτη που συνέκρινε τα ποσοστά εμβολιασμού με τα ποσοστά μόλυνσης από τον COVID-19 σε 68 χώρες και 2947 κομητείες στις Ηνωμένες Πολιτείες στις αρχές Σεπτεμβρίου 2021, δεν βρήκε καμία συσχέτιση μεταξύ των δύο, υποδηλώνοντας ότι αυτά τα εμβόλια δεν προστατεύουν από την εξάπλωση της νόσου ( Subramanian και Kumar, 2947). Όσον αφορά τη σοβαρότητα των συμπτωμάτων, ακόμη και αυτή η πτυχή αρχίζει να αμφισβητείται, όπως καταδεικνύεται από ένα ξέσπασμα σε ένα ισραηλινό νοσοκομείο που οδήγησε στον θάνατο πέντε πλήρως εμβολιασμένων ασθενών στο νοσοκομείο ( Shitrit et al., 2021 ). Ομοίως, οι Brosh-Nissimov et al. (2021) ανέφερε ότι 34/152 (22%) των πλήρως εμβολιασμένων ασθενών μεταξύ 17 νοσοκομείων του Ισραήλ πέθαναν από COVID-19.

Τα αυξανόμενα στοιχεία ότι τα εμβόλια κάνουν ελάχιστα στον έλεγχο της εξάπλωσης της νόσου και ότι η αποτελεσματικότητά τους μειώνεται με την πάροδο του χρόνου καθιστούν ακόμη πιο επιτακτική την αξιολόγηση του βαθμού στον οποίο τα εμβόλια ενδέχεται να προκαλέσουν βλάβη. Το ότι οι εμβολιασμοί mRNA πρωτεΐνης ακίδας με τροποποιημένη SARS-CoV-2 έχουν βιολογικές επιπτώσεις δεν αμφισβητείται. Εδώ προσπαθούμε να διακρίνουμε αυτές τις επιπτώσεις από τη φυσική μόλυνση και να δημιουργήσουμε ένα μηχανιστικό πλαίσιο που συνδέει αυτές τις μοναδικές βιολογικές επιπτώσεις με παθολογίες που συνδέονται τώρα με τον εμβολιασμό. Αναγνωρίζουμε ότι οι αιτιώδεις σχέσεις μεταξύ των βιολογικών επιπτώσεων που ξεκινούν από τον εμβολιασμό με mRNA και των δυσμενών εκβάσεων δεν έχουν τεκμηριωθεί στη μεγάλη πλειονότητα των περιπτώσεων.

2 . Ιντερφερόνες: μια επισκόπηση με προσοχή στην επιτήρηση του καρκίνου

Ανακαλύφθηκε το 1957, η ιντερφερόνη (IFN) κέρδισε το όνομά της με την αναγνώριση ότι τα κύτταρα που προκλήθηκαν από τον εξασθενημένο ιό της γρίπης Α δημιούργησαν μια ουσία που «παρενέβη» σε μια επακόλουθη μόλυνση από έναν ζωντανό ιό ( Lindenmann, 1982 ). Η IFN είναι πλέον κατανοητό ότι αντιπροσωπεύει μια πολύ μεγάλη οικογένεια ανοσοτροποποιητικών πρωτεϊνών, χωρισμένη σε τρεις τύπους, που ορίζονται ως τύπου Ι, II και III με βάση τους υποδοχείς με τους οποίους αλληλεπιδρά κάθε IFN. Η IFN τύπου Ι περιλαμβάνει τόσο την IFN-α όσο και την IFN-β, και αυτός ο τύπος είναι ο πιο διαφορετικός, χωρίζεται περαιτέρω σε δεκαεπτά υποτύπους. Μόνο η IFN-α έχει δεκατρείς υποτύπους που έχουν αναγνωριστεί επί του παρόντος, και καθένας από αυτούς χωρίζεται περαιτέρω σε πολλαπλές κατηγορίες ( Wang et al., 2017a). Οι IFN τύπου Ι παίζουν ισχυρό ρόλο στην ανοσολογική απόκριση σε πολλαπλούς στρεσογόνους παράγοντες. Στην πραγματικότητα, έχουν απολαύσει κλινική θεραπευτική αξία ως θεραπευτική επιλογή για μια ποικιλία ασθενειών και καταστάσεων, συμπεριλαμβανομένων ιογενών λοιμώξεων, συμπαγών όγκων , μυελοϋπερπλαστικών διαταραχών , αιμοποιητικών νεοπλασμάτων και αυτοάνοσων νοσημάτων όπως η σκλήρυνση κατά πλάκας (Passegu and Ernst, 2009).

Ως ομάδα, οι IFN παίζουν εξαιρετικά περίπλοκους και πλειοτροπικούς ρόλους που συντονίζονται και ρυθμίζονται μέσω της δραστηριότητας της οικογένειας των ρυθμιστικών παραγόντων IFN ή IRFs ( Kaur and Fang, 2020 ). Το IRF9 εμπλέκεται πιο άμεσα στην αντι-ιική καθώς και στην αντικαρκινική ανοσία και στη γενετική ρύθμιση ( Alsamman and El-Masry, 2018 ; Huang et al., 2019 ; Zitvogel et al., 2015 ).

Στενά σχετιζόμενα με αυτό είναι τα πλασματοκυτταροειδή δενδριτικά κύτταρα (pDCs), ένας σπάνιος τύπος ανοσοκυττάρων που κυκλοφορούν στο αίμα αλλά μεταναστεύουν στα περιφερειακά λεμφοειδή όργανα κατά τη διάρκεια μιας ιογενούς λοίμωξης. Αποκρίνονται σε μια ιογενή λοίμωξη ρυθμίζοντας απότομα προς τα πάνω την παραγωγή IFN τύπου Ι. Η IFN-α που απελευθερώνεται στους λεμφαδένες προκαλεί τα Β κύτταρα να διαφοροποιηθούν σε πλασματοβλάστες. Στη συνέχεια, η ιντερλευκίνη-6 (Il-6) διεγείρει τους πλασματοβλάστες να εξελιχθούν σε κύτταρα πλάσματος που εκκρίνουν αντισώματα ( Jego et al., 2003 ). Έτσι, οι IFN παίζουν κρίσιμο ρόλο τόσο στον έλεγχο του ιικού πολλαπλασιασμού όσο και στην επαγωγή της παραγωγής αντισωμάτων. Κεντρική θέση τόσο στην αντιική όσο και στην αντικαρκινική ανοσία, η IFN-α παράγεται από τα μακροφάγα και τα λεμφοκύτταρα όταν είτε προκαλείται με ιογενή ή βακτηριακή λοίμωξη ή συναντά καρκινικά κύτταρα (De Andrea et al., 2002 ). Ο ρόλος του ως ισχυρή αντιική θεραπεία έχει αναγνωριστεί στη θεραπεία των επιπλοκών του ιού της ηπατίτιδας C ( Feng et al., 2012 ), της λοίμωξης από κυτταρομεγαλοϊό ( Delannoy et al., 1999 ), της χρόνιας ενεργού λοίμωξης από τον ιό Έμπολα ( Sakai et al., 1998 ), φλεγμονώδης νόσος του εντέρου που σχετίζεται με μόλυνση από ιό έρπητα ( Ruther et al., 1998 ) και άλλοι.

Η εξασθενημένη σηματοδότηση IFN τύπου Ι συνδέεται με πολλούς κινδύνους ασθενειών, κυρίως με καρκίνο, καθώς η σηματοδότηση IFN τύπου Ι καταστέλλει τον πολλαπλασιασμό τόσο των ιών όσο και των καρκινικών κυττάρων διακόπτοντας τον κυτταρικό κύκλο, εν μέρει μέσω της ρύθμισης προς τα πάνω του p53, ενός ογκοκατασταλτικού γονιδίου και διαφόρων κυκλίνης -εξαρτώμενοι αναστολείς κινάσης ( Musella et al., 2017 ; Matsuoka et al., 1998 ). Η IFN-α επάγει επίσης την παρουσίαση αντιγόνου κατηγορίας 1 μείζονος ιστοσυμβατότητας (MHC) από καρκινικά κύτταρα, με αποτέλεσμα να αναγνωρίζονται πιο εύκολα από το σύστημα επιτήρησης του καρκίνου ( Heise et al., 2016 ; Sundstedt et al., 2008). Το εύρος των αντικαρκινικών επιδράσεων που ξεκινά από την έκφραση της IFN-α είναι εκπληκτικό και εμφανίζεται τόσο μέσω άμεσων όσο και έμμεσων μηχανισμών. Οι άμεσες επιδράσεις περιλαμβάνουν τη διακοπή του κυτταρικού κύκλου, την επαγωγή κυτταρικής διαφοροποίησης, την έναρξη της απόπτωσης, την ενεργοποίηση των φυσικών φονέων και των CD8 + Τ κυττάρων και άλλα ( Schneider et al., 2014 ).

Οι έμμεσες αντικαρκινικές επιδράσεις πραγματοποιούνται κυρίως μέσω της ενεργοποίησης γονιδιακής μεταγραφής του μετατροπέα σήματος κινάσης Janus και της οδού ενεργοποιητή της μεταγραφής (JAK/STAT). Η δέσμευση της IFN-α στην κυτταρική επιφάνεια εκκινεί την JAK, μια κινάση τυροσίνης , για να φωσφορυλιώσει τα STAT1 και STAT2 ( Asmana Ningrum, 2014 ). Μόλις φωσφορυλιωθούν, αυτά τα STAT σχηματίζουν ένα σύμπλεγμα με το IRF9, ένα από μια οικογένεια IRF που παίζουν ένα ευρύ φάσμα ρόλων στη ρύθμιση των ογκογονιδίων και σε άλλες κυτταρικές λειτουργίες ( Takaoka et al., 2008 ). Είναι αυτό το σύμπλεγμα, που ονομάζεται γονιδιακός παράγοντας 3 διεγερμένος από IFN (ISGF3), που μετατοπίζεται στον πυρήνα του κυττάρου για να ενισχύσει την έκφραση τουλάχιστον 150 γονιδίων ( Schneider et al., 2014). Το IRF9 έχει προταθεί ότι είναι το κύριο μέλος της οικογένειας πρωτεϊνών IRF που είναι υπεύθυνη για την ενεργοποίηση των αντιπολλαπλασιαστικών επιδράσεων της IFN-α, και αυτό φαίνεται ότι οφείλεται στη δέσμευσή του στον υποδοχέα 1 που προκαλεί απόπτωση συνδέτη (TRAIL) που σχετίζεται με τον παράγοντα νέκρωσης όγκου. and 2 (TRAIL-R1/2) ( Tsuno et al., 2009 ). Το IRF7 είναι ένα άλλο σημαντικό μέλος της οικογένειας πρωτεϊνών IRF που εμπλέκονται νωρίς στην απόκριση σε μια ιογενή λοίμωξη. Συνήθως εκφράζεται σε χαμηλές ποσότητες αλλά επάγεται έντονα από το ISGF3. Το IRF7 υφίσταται επίσης φωσφορυλίωση σερίνης και πυρηνική μετατόπιση για περαιτέρω ενεργοποίηση της ανοσολογικής απόκρισης. Το IRF7 έχει πολύ μικρό χρόνο ημιζωής, επομένως η διαδικασία γονιδιακής επαγωγής του είναι παροδική, ίσως για να αποφευχθεί η υπερέκφραση των IFNs ( Honda et al., 2006).

Μόλις το TRAIL δεσμευτεί από το IRF9, μπορεί στη συνέχεια να ενεργήσει ως συνδέτης για τον Υποδοχέα Θανάτου 4 (DR4) ή το DR5, ξεκινώντας μια σειρά γεγονότων που περιλαμβάνουν παραγωγή κασπάσης 8 και κασπάσης 3 και τελικά πυροδοτώντας απόπτωση ( Sayers, 2011 ). Η απορρύθμιση αυτής της οδού, μέσω της καταστολής είτε της IFN-α είτε της IRF9 και της αποτυχίας σύνδεσης του TRAIL-R που προκύπτει, έχει συσχετιστεί με αρκετές αιματολογικές κακοήθειες ( Testa, 2010 ) και έχει αποδειχθεί ότι αυξάνει το μεταστατικό δυναμικό σε ζωικά μοντέλα μελανώματος , καρκίνος του παχέος εντέρου και λέμφωμα ( Finnberg και El-Deiry, 2008 ).

Η IFN-α τόσο ξεκινά όσο και ενορχηστρώνει ένα ευρύ φάσμα ρόλων καταστολής του καρκίνου. Οι Dunn et al. (2005) έδειξε ότι η IFN-α παίζει ενεργό ρόλο στην ανοσοεπεξεργασία του καρκίνου, καθώς ο τόπος δράσης της είναι τα αιμοποιητικά κύτταρα που «προγραμματίζονται» μέσω της δέσμευσης IFN-α για την επιτήρηση του όγκου. Μέσω των εξαιρετικά πολύπλοκων αλληλεπιδράσεων μεταξύ των IFN τύπου Ι και των IRF7 και IRF9, ειδικότερα, πραγματοποιούνται πολλά αντιπολλαπλασιαστικά αποτελέσματα. Αυτό αποδεικνύεται από τον μεγάλο αριθμό μελετών που δείχνουν αυξημένη ανάπτυξη όγκου και/ή μεταστάσεις που σχετίζονται με μεγάλο αριθμό τύπων καρκίνου.

Για παράδειγμα, οι Bidwell et al. (2012) διαπίστωσαν ότι, μεταξύ 800 ασθενών με καρκίνο του μαστού, εκείνοι με υψηλή έκφραση γονιδίων που ρυθμίζονται από το IRF7 είχαν σημαντικά λιγότερες οστικές μεταστάσεις και προτείνουν την αξιολόγηση αυτών των γονιδιακών υπογραφών που σχετίζονται με το IRF7 ως τρόπο πρόβλεψης αυτών που διατρέχουν τον μεγαλύτερο κίνδυνο. Η χρήση του microRNA για τη στόχευση της έκφρασης IRF7 έχει επίσης αποδειχθεί ότι ενισχύει τον πολλαπλασιασμό και την εισβολή των κυττάρων του καρκίνου του μαστού in vitro ( Li et al., 2015 ). Οι Zhao et al. (2017) βρήκε παρόμοιο ρόλο για το IRF7 σε σχέση με τις οστικές μεταστάσεις σε ένα μοντέλο ποντικού καρκίνου του προστάτη . Όσον αφορά τον αντικαρκινικό μηχανισμό πίσω από την έκφραση IRF7,Solis et al. (2006) διαπίστωσαν ότι το IRF7 επάγει τη μεταγραφή πολλαπλών γονιδίων και τη μετάφραση των κατάντη πρωτεϊνικών προϊόντων τους, συμπεριλαμβανομένων των TRAIL, IL-15, ISG-56 και CD80, με τις σημειωμένες θεραπευτικές επιπτώσεις.

Το IRF9, επίσης, έχει να παίξει κεντρικό ρόλο στην παρακολούθηση και την πρόληψη του καρκίνου. Erb et al. (2013) απέδειξε ότι το IRF9 είναι ο μεσολαβητής μέσω του οποίου η IL-6 αυξάνει τις αντιπολλαπλασιαστικές επιδράσεις της IFN-α έναντι των καρκινικών κυττάρων του προστάτη. Οι Tian et al. (2018) βρήκε το IRF9 ως βασικό αρνητικό ρυθμιστή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων της οξείας μυελογενούς λευχαιμίας και της αποφυγής της απόπτωσης. Το κάνει, τουλάχιστον εν μέρει, μέσω ακετυλίωσης της κύριας ρυθμιστικής πρωτεΐνης p53.

Τόσο η IFN-α όσο και η IRF9 είναι επίσης προφανώς απαραίτητα για τις ιδιότητες πρόληψης του καρκίνου ενός πλήρως λειτουργικού γονιδίου BRCA2. Σε μια μελέτη που παρουσιάστηκε ως περίληψη στο Πρώτο Διεθνές Συνέδριο AACR on Frontiers in Basic Cancer Research, οι Mittal και Chaudhuri (2009) περιγράφουν ένα σύνολο πειραμάτων που δείχνουν για πρώτη φορά ότι η έκφραση BRCA2 οδηγεί σε αυξημένη παραγωγή IFN-α και αυξάνει την μονοπάτι μεταγωγής σήματος που έχει ως αποτέλεσμα τη συμπλοκοποίηση των IRF9, STAT1 και STAT2 που περιγράφηκαν προηγουμένως. Δύο χρόνια πριν, οι Buckley et al. (2007)είχε διαπιστώσει ότι το BRCA1 σε συνδυασμό με την IFN-γ προάγει τις IFN τύπου Ι και την επακόλουθη παραγωγή των IRF7, STAT1 και STAT2. Έτσι, τα εξαιρετικά σημαντικά ρυθμιστικά γονίδια του καρκίνου BRCA1 και BRCA2 βασίζονται στο IRF7 και το IRF9, αντίστοιχα, για την εκτέλεση των προστατευτικών τους επιδράσεων. Οι Rasmussen et al. (2021) εξέτασε τα επιτακτικά στοιχεία ότι οι ελλείψεις είτε του IRF7 είτε του IRF9 οδηγούν σε σημαντικά μεγαλύτερο κίνδυνο σοβαρής ασθένειας COVID-19. Είναι σημαντικό, επίσης, ότι τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι οι IFN τύπου Ι διαδραματίζουν έναν μοναδικό ρόλο στην προστατευτική ανοσία έναντι της νόσου COVID-19, έναν ρόλο που μοιράζονται οι πολλαπλές κυτοκίνες στις περισσότερες άλλες ιογενείς ασθένειες, συμπεριλαμβανομένης της γρίπης.

Όπως θα συζητηθεί με περισσότερες λεπτομέρειες παρακάτω, η γλυκοπρωτεΐνη ακίδας SARS-CoV-2 τροποποιεί την παραγωγή εξωσώματος του κυττάρου ξενιστή. Η επιμόλυνση των κυττάρων με το γονίδιο της πρωτεΐνης ακίδας και η επακόλουθη παραγωγή πρωτεΐνης ακίδας SARS-CoV-2 έχει ως αποτέλεσμα τα κύτταρα αυτά να δημιουργούν εξωσώματα που περιέχουν microRNA που καταστέλλουν την παραγωγή IRF9 ενώ ενεργοποιούν μια σειρά προφλεγμονωδών γονιδιακών μεταγραφών ( Mishra and Banerjea, 2021). Δεδομένου ότι αυτά τα εμβόλια έχουν σχεδιαστεί ειδικά για να προκαλέσουν υψηλή και συνεχή παραγωγή γλυκοπρωτεϊνών ακίδων SARS-CoV-2, οι συνέπειες είναι δυσοίωνες. Όπως περιγράφηκε παραπάνω, η αναστολή του IRF9 θα καταστείλει το TRAIL και όλες τις ρυθμιστικές και κατάντη επιδράσεις του που προκαλούν απόπτωση. Η καταστολή του IRF9 μέσω εξωσωματικού microRNA θα πρέπει επίσης να αναμένεται να βλάψει τις καρκινοπροστατευτικές επιδράσεις της δραστηριότητας του γονιδίου BRCA2, η οποία εξαρτάται από αυτό το μόριο για τη δραστηριότητά του όπως περιγράφεται παραπάνω. Οι καρκίνοι που σχετίζονται με το BRCA2 περιλαμβάνουν τον καρκίνο του μαστού, της σάλπιγγας και των ωοθηκών για τις γυναίκες, τον καρκίνο του προστάτη και του μαστού για τους άνδρες, την οξεία μυελογενή λευχαιμία στα παιδιά και άλλους ( Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, 2021 ).

Ο εμβολιασμός έχει επίσης αποδειχθεί ότι καταστέλλει τόσο το IRF7 όσο και το STAT2 ( Liu et al., 2021 ). Αυτό μπορεί να αναμένεται ότι θα επηρεάσει τις αντικαρκινοπροστατευτικές επιδράσεις του BRCA1 όπως περιγράφεται παραπάνω. Οι καρκίνοι που σχετίζονται με τη μειωμένη δραστηριότητα του BRCA1 περιλαμβάνουν τον καρκίνο του μαστού, της μήτρας και των ωοθηκών στις γυναίκες. καρκίνος προστάτη και μαστού στους άνδρες. και μια μέτρια αύξηση του καρκίνου του παγκρέατος τόσο για άνδρες όσο και για γυναίκες ( Κίνδυνος καρκίνου και γονίδιο BRCA1, 2021 ).

Η μειωμένη έκφραση του BRCA1 συνδέεται τόσο με τον καρκίνο όσο και με τον νευροεκφυλισμό . Το BRCA1 είναι ένα πολύ γνωστό γονίδιο ευαισθησίας στον καρκίνο του μαστού. Το BRCA1 αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του μαστού μέσω της ενεργοποίησης του SIRT1 και της επακόλουθης καταστολής του υποδοχέα ανδρογόνων ( Zang et al., 2016 ). Σε μια μελέτη που διεξήχθη από τους Suberbielle et al. (2015) , βρέθηκαν μειωμένα επίπεδα BRCA1 στους εγκεφάλους ασθενών με Αλτσχάιμερ. Επιπλέον, πειράματα με την κατάρριψη του νευρώνα BRCA1 στην οδοντωτή έλικα των ποντικών έδειξαν ότι οι θραύσματα του διπλού κλώνου του DNA αυξήθηκαν, μαζί με τη νευρωνική συρρίκνωση και τις βλάβες στη συναπτική πλαστικότητα, τη μάθηση και τη μνήμη.

Η ανάλυση που περιγράφεται λεπτομερώς σε μια πρόσφατη μελέτη περίπτωσης σε έναν ασθενή που διαγνώστηκε με μια σπάνια μορφή λεμφώματος που ονομάζεται λέμφωμα αγγειοανοσοβλαστικό Τ-λεμφοκύτταρο παρείχε ισχυρές ενδείξεις για απροσδόκητη ταχεία εξέλιξη των λεμφοματωδών βλαβών μετά τη χορήγηση του ενισχυτικού εμβόλου mRNA BNT162b2 ( Goldman et al., 20 ). Οι συγκρίσεις λεπτομερών μετρήσεων για υπερμεταβολικές βλάβες που πραγματοποιήθηκαν αμέσως πριν και 21 ημέρες μετά την ενίσχυση του εμβολίου αποκάλυψαν πενταπλάσια αύξηση μετά το εμβόλιο, με τη δοκιμή μετά την αναμνηστική να αποκαλύπτει 2 φορές υψηλότερο επίπεδο δραστηριότητας στη δεξιά μασχάλη σε σύγκριση με την αριστερή . Το εμβόλιο είχε γίνει με ένεση στη δεξιά πλευρά. Αξίζει να επισημανθεί από αυτή την άποψη ότι οι λεμφοειδείς κακοήθειες έχουν συσχετιστεί με την καταστολή του TRAIL-R1 ( MacFarlane et al., 2005).

Δεδομένης της παγκοσμίως αναγνωρισμένης σημασίας της βέλτιστης λειτουργίας BRCA1/2 για την πρόληψη του καρκίνου και δεδομένου του κεντρικού ρόλου της οδού μεταγωγής σήματος TRAIL για πρόσθετη επιτήρηση του καρκίνου, η καταστολή των IRF7 και IRF9 μέσω εμβολιασμού και επακόλουθης παραγωγής γλυκοπρωτεΐνης ακίδας SARS-CoV-2 είναι εξαιρετικά που αφορούν τον μακροπρόθεσμο έλεγχο του καρκίνου σε πληθυσμούς που έχουν εγχυθεί με γενετικό εμβόλιο SARS-CoV-2.

3 . Παρατηρήσεις στο σχεδιασμό των εμβολίων mRNA

Τις τελευταίες τρεις δεκαετίες, η τεχνολογική πλατφόρμα mRNA που στόχευε στην ανάπτυξη αποτελεσματικών και ασφαλών θεραπευτικών εργαλείων νουκλεϊκού οξέος λέγεται ότι έχει ξεπεράσει σοβαρά εμπόδια σχετικά με την αστάθεια του κωδικοποιημένου προϊόντος, τη συντριπτική έμφυτη ανοσογονικότητα και τις μεθοδολογίες χορήγησης ( Pardi et al., 2018 ). Μία από τις σημαντικότερες ιστορίες επιτυχίας της χρήσης του mRNA ως εργαλείου γενετικού εμβολιασμού είναι η εισαγωγή ισχυρής ανοσίας κατά του καρκίνου ( Van Lint et al., 2015 ). Επιπλέον, η δυνατότητα των mRNAs να αποκαθιστούν ή να αντικαταστήσουν διάφορους τύπους πρωτεϊνών σε περιπτώσεις σπάνιων γενετικών μεταβολικών διαταραχών όπως η νόσος Fabry έχει προσφέρει μεγάλες πιθανές θεραπευτικές εναλλακτικές λύσεις όπου κανένα άλλο φάρμακο δεν έχει αποδειχθεί επιτυχές (Martini and Guey, 2019 ). Ωστόσο, στην περίπτωση της χρήσης mRNA ως γενετικών εμβολίων κατά μολυσματικών ασθενειών, οι προκαταρκτικές έρευνες ασφάλειας φάνηκαν να είναι πρόωρες για παγκόσμια χρήση στον γενικό πληθυσμό ( Pardi et al., 2018 ; Doulberis et al., 2021 ).

Αν και υπάρχουν βασικοί επίτοποι σε άλλες πρωτεΐνες SARS-CoV-2 όπου μια απόκριση αντισωμάτων θα μπορούσε να έχει παράσχει ουσιαστική ανοσογονικότητα, γνωστή από το SARS-CoV-1 ( Gordon et al., 2020 ), ο πρωταρχικός στόχος των προγραμματιστών του SARS- Τα εμβόλια mRNA του CoV-2 επρόκειτο να σχεδιάσουν ένα εμβόλιο που θα μπορούσε να προκαλέσει μια ισχυρή απόκριση αντισωμάτων αποκλειστικά στη γλυκοπρωτεΐνη ακίδας . Τέτοια αντισώματα, ειδικά η IgA στο ρινοφάρυγγα, θα πρέπει να κάνουν τους ιούς που εισβάλλουν να απομακρυνθούν γρήγορα πριν εισβάλουν στα κύτταρα ξενιστές, διακόπτοντας έτσι τη διαδικασία της νόσου νωρίς. Όπως αναφέρθηκε συνοπτικά από τους Kaczmarek et al. (2021) :

«Το σκεπτικό πίσω από τον εμβολιασμό είναι να παρέχεται σε κάθε εμβολιασμένο άτομο προστασία έναντι του ιού SARS-CoV-2. Αυτή η προστασία επιτυγχάνεται διεγείροντας το ανοσοποιητικό σύστημα να παράγει αντισώματα κατά του ιού και να αναπτύξει λεμφοκύτταρα που θα διατηρήσουν τη μνήμη και την ικανότητα να καταπολεμούν τον ιό για μεγάλο χρονικό διάστημα». Ωστόσο, δεδομένου ότι ο εμβολιασμός χορηγείται παρεντερικά, το IgG είναι η κύρια κατηγορία αντισωμάτων που αναπτύσσεται έναντι της γλυκοπρωτεΐνης ακίδας SARS-CoV-2, όχι της IgA ( Wisnewski et al., 2021 ).

Τα εμβόλια γενικά εξαρτώνται από πρόσθετα όπως το αλουμίνιο και το σκουαλένιο για να προκαλέσουν τα κύτταρα του ανοσοποιητικού να μεταναστεύσουν στο σημείο της ένεσης αμέσως μετά τον εμβολιασμό. Στην ιστορία της ανάπτυξης του εμβολίου mRNA, αρχικά υπήρχε η ελπίδα ότι το ίδιο το mRNA θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως το δικό του ανοσοενισχυτικό. Αυτό συμβαίνει επειδή τα ανθρώπινα κύτταρα αναγνωρίζουν το ιικό RNA ως ξένο και αυτό οδηγεί σε ρύθμιση προς τα πάνω των IFN τύπου Ι , με τη μεσολάβηση μέσω υποδοχέων όπως οι TLR3 TLR7 και TLR8 ( Karik ó et al., 2005 ).

Ωστόσο, με τον καιρό έγινε σαφές ότι υπήρχαν προβλήματα με αυτήν την προσέγγιση, τόσο επειδή η έντονη αντίδραση θα μπορούσε να προκαλέσει συμπτώματα γρίπης όσο και επειδή η IFN-α θα μπορούσε να προκαλέσει μια καταρράκτη απόκριση που θα οδηγούσε στη διάσπαση του mRNA πριν μπορέσει να παράγει επαρκή ποσότητες SARS-CoV-2 ακίδα γλυκοπρωτεΐνης για να προκληθεί ανοσοαπόκριση ( de Beuckelaer et al., 2016 ). Μια σημαντική ανακάλυψη έγινε όταν ανακαλύφθηκε πειραματικά ότι το mRNA που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη ακίδας θα μπορούσε να τροποποιηθεί με συγκεκριμένους τρόπους που ουσιαστικά θα ξεγελούσαν τα ανθρώπινα κύτταρα ώστε να το αναγνωρίσουν ως αβλαβές ανθρώπινο RNA. Μια σημαντική εργασία από τους Karikó et al. (2005) απέδειξε μέσα από μια σειρά πειραμάτων in vitro ότι μια απλή τροποποίηση στο mRNA έτσι ώστε όλες οι ουριδίνες αντικαταστάθηκαν με ψευδουριδίνη θα μπορούσαν να μειώσουν δραματικά την έμφυτη ανοσολογική ενεργοποίηση έναντι του εξωγενούς mRNA. Andries et al. (2015) ανακάλυψε αργότερα ότι η 1-μεθυλψευδοουριδίνη ως αντικατάσταση της ουριδίνης ήταν ακόμη πιο αποτελεσματική από την ψευδουριδίνη και θα μπορούσε ουσιαστικά να καταργήσει την απόκριση TLR στο mRNA, αποτρέποντας την ενεργοποίηση δενδριτικών κυττάρων που προέρχονται από το αίμα. Αυτή η τροποποίηση εφαρμόζεται και στα δύο εμβόλια mRNA στην αγορά ( Park et al., 2021 ).

Μάλλον προφητικά, η εκτενής ανασκόπηση των Forni και Mantovani (2021) έχει εγείρει σοβαρά ερωτήματα σχετικά με την ανάπτυξη έμφυτης ανοσίας από τους γενετικούς εμβολιασμούς mRNA SARS-CoV-2. Όπως δήλωσαν οι συγγραφείς: «Λόγω του σύντομου χρόνου ανάπτυξης και της καινοτομίας των τεχνολογιών που υιοθετήθηκαν, αυτά τα εμβόλια θα αναπτυχθούν με πολλά ανεπίλυτα ζητήματα που μόνο το πέρασμα του χρόνου θα επιτρέψει να διευκρινιστούν». Στη συνέχεια, οι συγγραφείς συνέστησαν τη συμπερίληψη ορισμένων μορίων όπως η μακρά πεντραξίνη PTX3 ως αντιπροσωπευτικοί δείκτες χυμικής ανοσίας για την αξιολόγηση της πρώιμης ενεργοποίησης των έμφυτων ανοσολογικών μηχανισμών και της υποκείμενης αντιδραστικότητας σύμφωνα με τα πρωτόκολλα της κοινοπραξίας BIOVACSAFE ( Forni and Mantovani, 2021 ; Weiner 209et al.). Ωστόσο, από όσο γνωρίζουμε αυτά τα πρωτόκολλα ασφαλείας δεν έχουν συμπεριληφθεί στην αξιολόγηση της επαγόμενης έμφυτης ανοσίας από τα γενετικά εμβόλια mRNA του SARS-CoV-2 ( Mulligan et al., 2020 ).

Από αυτή την άποψη, στην περίπτωση του εμβολίου SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA, σε αντίθεση με την ανοσολογική απόκριση που προκαλείται από τη φυσική μόλυνση SARS-CoV-2, όπου παρατηρείται ισχυρή απόκριση ιντερφερόνης, όσοι εμβολιάστηκαν με εμβόλια mRNA BNT162b2 ανέπτυξαν ένα ισχυρό προσαρμοστικό ανοσοποιητικό απόκριση η οποία περιοριζόταν μόνο στα κύτταρα μνήμης, δηλαδή, μια εναλλακτική οδός ανοσοαπόκρισης που παρέκαμψε τις οδούς που διαμεσολαβούνται από την IFN ( Mulligan et al., 2020 ). Επιπλέον, λόγω επακόλουθων μεταλλάξεων στην πρωτεΐνη ακίδας SARS-CoV-2, υπάρχει σημαντική απώλεια εξουδετερωτικών αντισωμάτων που προκαλείται από το εμβόλιο mRNA BNT162b2 σε σύγκριση με εκείνα που παρέχονται μόνο από τα μεταλλάγματα SARS-CoV-2 ( Collier et al., 2021). Από την άποψη αυτή, όπως παραδέχονται οι προγραμματιστές εμβολίων: «Το RNA του εμβολίου μπορεί να τροποποιηθεί ενσωματώνοντας 1-μεθυλψευδοουριδίνη, η οποία μειώνει την έμφυτη ανοσολογική αίσθηση και αυξάνει τη μετάφραση του mRNA in vivo ». ( Mulligan et al., 2020 ; Katalin Karikó et al., 2008 ). Έχοντας κατά νου τις πολλαπλές μεταλλάξεις που αναπτύσσει ο SARS-CoV-2, όπως για παράδειγμα στις εστίες της Βραζιλίας ( Timmers et al., 2021), μια αποτελεσματική ανοσοαπόκριση που αποτρέπει την εξάπλωση των μεταλλαγμάτων SARS-CoV2 περιλαμβάνει απαραίτητα την ανάπτυξη μιας ισχυρής απόκρισης IFN-I ως μέρος του έμφυτου ανοσοποιητικού συστήματος. Αυτή η απόκριση απαιτεί επίσης τη συμμετοχή μιας λειτουργικής απόκρισης NF-κB. Δυστυχώς, η υπερέκφραση της γλυκοπρωτεΐνης ακίδας διαλύει τις αποκρίσεις της οδού NF-κB και αυτό το μοριακό συμβάν μπορεί να αυξηθεί από mRNA που κωδικοποιούν πρωτεΐνες ακίδας ( Kyriakopoulos and McCullough, 2021 ; Jiang and Mei, 2021 ).

Για επιτυχημένο σχεδιασμό εμβολίου mRNA, το mRNA πρέπει να ενθυλακωθεί σε προσεκτικά κατασκευασμένα σωματίδια που μπορούν να προστατεύσουν το RNA από την αποικοδόμηση από τις RNA αποπολυμεράσες. Τα εμβόλια mRNA διαμορφώνονται ως νανοσωματίδια λιπιδίων που περιέχουν χοληστερόλη και φωσφολιπίδια , με το τροποποιημένο mRNA να συμπλέκεται με έναν εξαιρετικά τροποποιημένο λιπιδικό κορμό πολυαιθυλενογλυκόλης (PEG) για να προάγει την πρώιμη απελευθέρωσή του από το ενδοσώμα και να το προστατεύει περαιτέρω από την αποικοδόμηση (Hou et al., 2021). Ο υπάρχων βιολογικός μηχανισμός του κυττάρου ξενιστή επιλέγεται για να διευκολύνει τη φυσική παραγωγή πρωτεΐνης από το mRNA μέσω της ενδοσωμικής πρόσληψης ενός σωματιδίου λιπιδίου (Hou et al., 2021). Προστίθεται επίσης ένα συνθετικό κατιονικό λιπίδιο, καθώς έχει αποδειχθεί πειραματικά ότι λειτουργεί ως ανοσοενισχυτικό για την έλξη ανοσοκυττάρων στο σημείο της ένεσης και τη διευκόλυνση της ενδοσωμικής διαφυγής. de Beuckelaer et al. (2016) παρατήρησε ότι «η συμπύκνωση του mRNA σε κατιονικά λιπόλεξα αυξάνει την ισχύ του εμβολίου mRNA που προκαλεί την απόκριση των Τ κυττάρων κατά πολλές τάξεις μεγέθους». Μια άλλη σημαντική τροποποίηση είναι ότι αντικατέστησαν τον κώδικα για δύο γειτονικά αμινοξέα στο γονιδίωμα με κωδικούς για την προλίνη , η οποία αναγκάζει τη γλυκοπρωτεΐνη της ακίδας να παραμείνει σε σταθεροποιημένη μορφή πριν από την έγχυση ( Wrapp et al., 2020 ).

Το mRNA της γλυκοπρωτεΐνης ακίδας του SARS-CoV-2 «εξανθρωπίζεται» περαιτέρω με την προσθήκη ενός καλύμματος μεθυλιωμένου με γουανίνη, 3' και 5' αμετάφραστων περιοχών (UTRs) που αντιγράφονται από αυτές των ανθρώπινων πρωτεϊνών και, τέλος, μιας μακριάς ουράς πολυ(Α) για περαιτέρω σταθεροποίηση του RNA ( Kyriakopoulos and McCullough, 2021 ). Συγκεκριμένα, οι ερευνητές επέλεξαν έξυπνα το 3'UTR που λαμβάνεται από σφαιρίνες που παράγονται σε μεγάλες ποσότητες από ερυθροκύτταρα, επειδή είναι πολύ αποτελεσματικό στην προστασία του mRNA από την αποικοδόμηση και στη διατήρηση της παρατεταμένης παραγωγής πρωτεΐνης ( Orlandini von Niessen et al., 2019). Αυτό είναι αναμενόμενο, καθώς τα ερυθροκύτταρα δεν έχουν πυρήνα, επομένως δεν μπορούν να αντικαταστήσουν τα mRNA μόλις καταστραφούν. Τόσο τα εμβόλια Moderna όσο και τα εμβόλια Pfizer υιοθέτησαν ένα 3'UTR από σφαιρίνες και το εμβόλιο Pfizer χρησιμοποιεί επίσης μια ελαφρώς τροποποιημένη σφαιρίνη 5'UTR ( Xia, 2021 ). de Beuckelaer et al. (2016) συνόψισε εύστοχα τις συνέπειες τέτοιων τροποποιήσεων ως εξής: «Τα τελευταία χρόνια, τεχνικές βελτιώσεις στον τρόπο παρασκευής των IVT [in vitro μεταγραφόμενων] mRNAs (τροποποιήσεις 5′ Cap, βελτιστοποιημένο περιεχόμενο GC, βελτιωμένες ουρές polyA, σταθεροποίηση UTRs ) έχουν αυξήσει τη σταθερότητα των IVT mRNAs σε τέτοιο βαθμό που η έκφραση πρωτεΐνης μπορεί τώρα να επιτευχθεί για ημέρες μετά την άμεση in vivo χορήγηση του mRNA.

Ωστόσο, ο βελτιστοποιημένος σχηματισμός αναλογικού καλύμματος των συνθετικών mRNA αναπόφευκτα αναγκάζει τα κύτταρα-δέκτες να υποβληθούν σε παρατεταμένη μετάφραση εξαρτώμενη από το καπάκι, αγνοώντας τις ομοιοστατικές απαιτήσεις της κυτταρικής φυσιολογίας ( Kyriakopoulos and McCullough, 2021 ). Η μεθυλίωση του καπακιού 2'-Ο που πραγματοποιείται από το καπάκι 2'-Ο μεθυλοτρανσφεράση (CMTR1) χρησιμεύει ως μοτίβο που επισημαίνει το mRNA ως «εαυτό», για να αποτρέψει την αναγνώριση από πρωτεΐνες δέσμευσης RNA που προκαλούνται από IFN ( Williams et al., 2020). Έτσι, το mRNA στα εμβόλια, εξοπλισμένο με το μοτίβο μεθυλίωσης 2'-Ο, αποφεύγει την ανίχνευση ως εισβολή ιού. Επιπλέον, η συντριπτική ώθηση για τα κύτταρα να εκτελέσουν μια ενιαία και τεχνητή προσέγγιση στη μετάφραση σύμφωνα με την ισχυρή κάλυψη και τις συνθετικές μεθυλώσεις των mRNAs στα εμβόλια σχετίζεται θεμελιωδώς με την εξέλιξη της νόσου λόγω της διαφορικής και όχι της κανονικής σηματοδότησης των υποδοχέων αναγνώρισης προτύπων (PRRs) ( Leung και Amarasinghe, 2016 ).

Η ρυθμιστική διαδικασία που ελέγχει τη μετάφραση του mRNA είναι εξαιρετικά περίπλοκη και είναι ιδιαίτερα διαταραγμένη στο πλαίσιο των εμβολίων mRNA ( Kyriakopoulos and McCullough, 2021 ; Leung and Amarasinghe, 2016). Εν συντομία, η ιδέα είναι τα εμβόλια mRNA να επιτύχουν τον επιδιωκόμενο στόχο (δηλαδή, την παραγωγή της τροποποιημένης πρωτεΐνης ακίδας) μέσω μιας στρατηγικής μυστικότητας που παρακάμπτει τη φυσική ανοσολογική απόκριση σε ιογενή μόλυνση τύπου RNA. Τα εγχυόμενα νανοσωματίδια λιπιδίων που περιέχουν mRNA μεταφέρονται στο εσωτερικό του κυττάρου μέσω ενδοκυττάρωσης. Το mRNA διαφεύγει από τον λιπιδικό του φορέα και μεταναστεύει στο ριβόσωμα, όπου μεταφράζεται άφθονα στο τελικό πρωτεϊνικό του προϊόν, ακολουθώντας ένα βελτιστοποιημένο πρόγραμμα για την παραγωγή μεγάλων ποσοτήτων συγκεκριμένης πρωτεΐνης για εκτεταμένη χρονική περίοδο. Αυτές οι τροποποιημένες γλυκοπρωτεΐνες ακίδας SARS-CoV-2 ακολουθούν στη συνέχεια μία από τις τρεις κύριες οδούς. Μερικά αποικοδομούνται πρωτεολυτικά και θραύσματα δεσμεύονται από μόρια MHC τάξης Ι για επιφανειακή παρουσίαση σε κυτταροτοξικά Τ-κύτταρα. Μια δεύτερη οδός έχει τα ίδια θραύσματα γλυκοπρωτεΐνης ακίδας να δεσμεύουν μόρια MHC τάξης II, να μετακινούνται στην κυτταρική επιφάνεια και να ενεργοποιούν τα Τ-βοηθητικά κύτταρα. Μια τελική οδός έχει διαλυτές γλυκοπρωτεΐνες ακίδας που εξωθούνται από το κύτταρο σε εξωσώματα, όπου μπορούν να αναγνωριστούν από ενεργοποιημένα από Β-κύτταρα ειδικά αντισώματα ακίδας-γλυκοπρωτεΐνης (Chaudhary et al., 2021 ).

Μια πρόσφατη μελέτη πρώιμης αποδέσμευσης διαπίστωσε ότι το mRNA στα εμβόλια COVID-19 υπάρχει στα βλαστικά κέντρα του δευτερογενούς λεμφικού ιστού πολύ μετά τη χορήγηση του εμβολίου και ότι συνεχίζει να συνθέτει γλυκοπρωτεΐνη ακίδας έως και τουλάχιστον εξήντα ημέρες μετά τον εμβολιασμό. ( Röltgen et al., 2022 ). Αυτό υποδηλώνει ότι τα ανοσοκύτταρα που προσλαμβάνουν το mRNA στον μυ του βραχίονα μεταναστεύουν στο λεμφικό σύστημα στους λεμφαδένες , πιθανώς για να εκθέσουν τα Β-κύτταρα και τα Τ-κύτταρα στο τοξικό αντιγόνο. Η επιμονή του mRNA στους λεμφαδένες και η παρατεταμένη σύνθεση της γλυκοπρωτεΐνης ακίδας SARS-CoV-2 αντικατοπτρίζει την έξυπνη μηχανική που εμπλέκεται στην τεχνολογία mRNA, όπως περιγράφεται παραπάνω.

Στο τέλος, μέσω της χρήσης νανολιπιδίων και εξελιγμένης τεχνολογίας mRNA αποφεύγεται η φυσιολογική ανοσοαπόκριση στο εξωγενές RNA προκειμένου να παραχθεί μια ισχυρή απόκριση αντισωμάτων έναντι ενός εξωγενούς ιού RNA.

4 . Εμπλουτισμός GC και πιθανές δομές G4 (pG4) σε mRNA εμβολίων

Πρόσφατα, μέλη της ομάδας μας ερεύνησαν πιθανές αλλαγές στη δευτερογενή δομή των mRNA στα εμβόλια SARS-CoV-2 λόγω βελτιστοποίησης κωδικονίων των συνθετικών μεταγραφών mRNA ( McKernan et al., 2021 ). Αυτή η μελέτη έδειξε ότι υπάρχει σημαντικός εμπλουτισμός της περιεκτικότητας σε GC σε mRNA στα εμβόλια (53% στο BNT162b2 και 61% στο Moderna mRNA-1273) σε σύγκριση με το εγγενές mRNA του SARS-CoV-2 (36%). Η εμπλουτισμένη περιεκτικότητα σε GC των mRNA είναι το αποτέλεσμα της βελτιστοποίησης κωδικονίων που πραγματοποιήθηκε κατά την ανάπτυξη των mRNA που χρησιμοποιούνται στα εμβόλια SARS-CoV-2, προφανώς χωρίς να προσδιοριστεί η επίδραση σε δευτερεύουσες δομές, ιδιαίτερα στον σχηματισμό τετραπλού γουανίνης (G quadruplex) ( McKernan et al. ., 2021 ).

Η βελτιστοποίηση κωδικονίων περιγράφει την παραγωγή συνθετικών πολυπεπτιδίων και πρωτεϊνών βελτιστοποιημένων για κωδικόνια που χρησιμοποιούνται στη βιοτεχνολογική θεραπευτική (όπως τα συνθετικά mRNA που χρησιμοποιούνται για τον εμβολιασμό SARS-CoV-2). Οι τροποποιημένες αντιστοιχίσεις κωδικονίων εντός του εκμαγείου mRNA αυξάνουν δραματικά την ποσότητα των παραγόμενων πολυπεπτιδίων και/ή πρωτεϊνών ( Mauro and Chappell, 2014 ). Η αντικατάσταση συνώνυμων κωδικονίων οδηγεί επίσης σε μια αλλαγή στους πολυλειτουργικούς ρυθμιστικούς και δομικούς ρόλους των πρωτεϊνών που προκύπτουν ( Shabalina et al., 2013). Για το λόγο αυτό, η βελτιστοποίηση κωδικονίων έχει προειδοποιηθεί λόγω των επακόλουθων αλλαγών που προκαλούν διαταραχές στη δευτερογενή διαμόρφωση των πρωτεϊνικών προϊόντων με δυνητικά καταστροφικές επιπτώσεις στην προκύπτουσα ανοσογονικότητα, αποτελεσματικότητα και λειτουργία τους ( Zhou et al., 2013 ; Agashe et al., 2013 ). Σημειωτέον, διάφορες ανθρώπινες ασθένειες είναι αποτέλεσμα συνώνυμων νουκλεοτιδικών πολυμορφισμών ( McCarthy et al., 2017 ).

Σε ένα πείραμα όπου οι πλούσιες σε GC και οι φτωχές σε GC εκδόσεις των μεταγραφών mRNA για την πρωτεΐνη θερμικού σοκ 70 διαμορφώθηκαν στο πλαίσιο πανομοιότυπων προαγωγέων και αλληλουχιών UTR, βρέθηκε ότι τα πλούσια σε GC γονίδια εκφράστηκαν πολλές φορές σε πάνω από εκατό διπλώνουν πιο αποτελεσματικά από τους αντίστοιχους με φτωχό GC ( Kudla et al., 2006 ). Αυτό οφείλεται εν μέρει στο ότι όλα τα προτιμώμενα κωδικόνια θηλαστικών έχουν νουκλεοτίδια G ή C στην τρίτη θέση. Είναι επίσης καλά τεκμηριωμένο ότι στοιχεία πλούσια σε AU στα 3' UTRs μπορούν να αποσταθεροποιήσουν το mRNA ( Otsuka et al., 2019 ). Αυτό που μπορεί να προκαλεί ιδιαίτερη ανησυχία είναι το γεγονός ότι το περιεχόμενο εμπλουτισμού GC στα mRNA των εμβολίων έχει ως αποτέλεσμα μια ενισχυμένη ικανότητα για πιθανούς σχηματισμούς G-quadruplex (pG4) σε αυτές τις δομές, και αυτό θα μπορούσε να προκαλέσει την εμφάνισηνευρολογική νόσο ( Wang et al., 2021 ). Είναι αξιοσημείωτο ότι η γενετική αλληλουχία της ανθρώπινης πρωτεΐνης πριόν (PrP) περιέχει πολλαπλά μοτίβα σχηματισμού G4 και η παρουσία τους μπορεί να αποτελέσει τον κρίκο που λείπει στην αρχική μετατροπή του PrP στην λανθασμένα διπλωμένη μορφή, PrPsc ( Olsthoorn, 2014 ). Η σύνδεση του PrP στο δικό του mRNA μπορεί να είναι ο σπόρος που προκαλεί την κακή αναδίπλωση της πρωτεΐνης. Αυτή η παρατήρηση είναι ιδιαίτερα ανησυχητική υπό το φως του γεγονότος ότι η γλυκοπρωτεΐνη ακίδας SARS-CoV-2 έχει χαρακτηριστικά που μοιάζουν με πριόν ( Tetz and Tetz, 2022 ).

Από τη μία πλευρά, το περιεχόμενο GC έχει βασικό ρόλο στη ρύθμιση της αποτελεσματικότητας της μετάφρασης και στον έλεγχο της έκφρασης του mRNA στα θηλαστικά ( Babendure et al., 2006 ). Ειδικά κατά την έναρξη της μετάφρασης, το περιεχόμενο GC που λειτουργεί ως στοιχείο mRNA που ενεργεί cis ενορχηστρώνει την προσκόλληση του συμπλέγματος 43S ριβοσωμικής προ-έναρξης και στη συνέχεια τη συναρμολόγηση του συμπλέγματος ευκαρυωτικού παράγοντα έναρξης μετάφρασης 4F (eIF4F). Ένα αντιπροσωπευτικό παράδειγμα αυτού του συστήματος σε δράση είναι η ρύθμιση της έκφρασης mRNA α και β σφαιρίνης μέσω των 5' αμετάφραστων περιοχών τους (5'UTRs) ( Babendure et al., 2006 ).

Από την άλλη πλευρά, η παρουσία των pG4s στα RNA εμπλέκεται στη βιολογία του καρκίνου ως βασικοί καθοριστικοί παράγοντες της ρύθμισης των πρωτεϊνών που δεσμεύουν το G4 RNA όπως η ελικάση ( Herdy et al., 2018 ). Γενικά, τα G-τετράπτυχα στα RNA έχουν ουσιαστικούς ρόλους α) στη ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης, β) στον εντοπισμό ριβοπυρηνικών πρωτεϊνών , γ) στον εντοπισμό του mRNA και δ) στη ρύθμιση της έκφρασης πρωτο-ογκογονιδίου ( Fay et al., 2017 ).

Όσον αφορά το SARS-CoV-2, σχετικές μελέτες αποκαλύπτουν συντριπτικές ομοιότητες μεταξύ των pG4 του SARS-CoV-2, συμπεριλαμβανομένου του RNA που κωδικοποιεί την γλυκοπρωτεΐνη ακίδας SARS-CoV-2, και εκείνων που προσδιορίζονται σε αλληλουχία στο ανθρώπινο μεταγράφημα ( Zang et al., 2020 ). Έτσι, μπορεί να συναχθεί ότι τα συνθετικά mRNA σε εμβόλια που φέρουν περισσότερες δομές pG4 στην κωδικοποιητική τους αλληλουχία για την γλυκοπρωτεΐνη ακίδας SARS-CoV-2 θα ενισχύσουν και θα συνθέσουν την πιθανή μετα-μεταγραφική αποδιοργάνωση λόγω του RNA εμπλουτισμένου με G4 κατά τη διάρκεια του φυσικού SARS-CoV-2 μόλυνση. Επιπλέον, η κυτταρική πρωτεΐνη που δεσμεύει νουκλεϊκό οξύ (CNBP), η οποία είναι η κύρια κυτταρική πρωτεΐνη που συνδέεται με το γονιδίωμα RNA του SARS-CoV-2 σε κύτταρα μολυσμένα από τον άνθρωπο ( Schmidt et al., 2021), δεσμεύεται και προάγει το ξεδίπλωμα των SARS-CoV-2 G4 που σχηματίζονται τόσο από θετικούς όσο και από αρνητικούς κλώνους προτύπου του γονιδιώματος SARS-CoV-2 RNA. Μια παρόμοια τροποποίηση του CNBP στα mRNA G4 του εμβολίου και η προώθηση της ισορροπίας G4 προς τις ξεδιπλωμένες διαμορφώσεις δημιουργούν ευνοϊκές συνθήκες για τη δέσμευση miRNA και αυτό θα έχει άμεσο αντίκτυπο στην εξαρτώμενη από miRNA ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης ( Rouleau et al., 2017 ).

Τα αρνητικής σημασίας RNA είναι ενδιάμεσα μόρια που παράγονται από το σύμπλεγμα τρανσκριπτάσης ρεπλικάσης (RTC) που σχηματίζεται από τις μη δομικές πρωτεΐνες των κοροναϊών (συμπεριλαμβανομένου του SARS-CoV-2) για να παρέχουν αποτελεσματικότητα στην αντιγραφή και τη μεταγραφή ( Bezzi et al., 2021 ; Sola et al. ., 2015 ). Αυτό, ωστόσο, εισάγει μια άλλη δυνητικά σοβαρή επιπλοκή που σχετίζεται με τον εμβολιασμό. Συνλοίμωξη με άλλους ιούς RNA αρνητικής αίσθησης όπως η ηπατίτιδα C ( Jaubert et al., 2018) ή μόλυνση από άλλους κοροναϊούς ταυτόχρονα με περιόδους εμβολιασμού θα παρείχε τον απαραίτητο μηχανισμό του RTC για την αναπαραγωγή ενδιάμεσων αρνητικών νοημάτων από συνθετικά mRNAs και επομένως θα ενίσχυε την παρουσία των pG4s με πρότυπα αρνητικής αίσθησης. Αυτό θα οδηγούσε σε περαιτέρω επιμεταγραφική δυσρύθμιση ( Spiegel et al., 2020 ).

Συνοψίζοντας το θέμα σε αυτό το σημείο, ο εμπλουτισμός της περιεκτικότητας GC στο mRNA του εμβολίου θα οδηγήσει αναπόφευκτα σε αύξηση της περιεκτικότητας pG4 των εμβολίων. Αυτό, με τη σειρά του, θα οδηγήσει σε απορύθμιση του συστήματος δέσμευσης πρωτεΐνης G4-RNA και σε ένα ευρύ φάσμα πιθανών κυτταρικών παθολογιών που σχετίζονται με νόσο, συμπεριλαμβανομένης της καταστολής της έμφυτης ανοσίας, του νευροεκφυλισμού και του κακοήθους μετασχηματισμού ( Herdy et al., 2018 ).

Σχετικά με τη μεταφραστική απορρύθμιση λόγω της εμφάνισης νέων δομών G4 που εισάγονται με τον εμβολιασμό, ανακύπτει ένα άλλο σημαντικό ζήτημα που σχετίζεται με τη ρύθμιση του miRNA και του pG4. Σε δομές miRNA, αναγνωρίζονται εκατοντάδες αλληλουχίες pG4 ( Rouleau et al., 2018 ). Στην ξεδιπλωμένη τους διαμόρφωση, όπως κατά τη δέσμευση με τους αντίστοιχους στόχους τους σε αλληλουχίες 3' έως 5' mRNAs, τα miRNA απενεργοποιούν τη μετάφραση του αντίστοιχου mRNA στόχου τους. Εναλλακτικά, όταν παρουσία ενός συνδέτη G4, προωθείται η μετάφραση των mRNA στόχων τους ( Chan et al., 2018). Επιπλέον, ένας τεράστιος αριθμός υποτιθέμενων θέσεων δέσμευσης miRNA επικαλύπτονται με G4s σε 3' UTRs των mRNAs, καθώς υπάρχουν τουλάχιστον 521 συγκεκριμένα miRNA που προβλέπεται να δεσμεύονται σε τουλάχιστον ένα από αυτά τα G4. Συνολικά, 44.294 πιθανές θέσεις δέσμευσης G4-miRNA έχουν εντοπιστεί ότι διαθέτουν πιθανά επικαλυπτόμενα G4 στους ανθρώπους ( Rouleau et al., 2017 ).

Όπως περιγράφεται αλλού, κατά τη διάρκεια της κυτταρικής μετάφρασης των mRNA του εμβολίου , θα συμβεί μια αυξημένη συναρμολόγηση ενός αριθμού ελικάσες πρωτεΐνης που δεσμεύουν το RNA, όπως το eIF4A συνδεδεμένο με το eIF4G (Kyriakopoulos and McCullough, 2021 ). Η παρουσία αυξημένων pG4 στα συνθετικά mRNA μπορεί δυνητικά να ενισχύσει τη δέσμευση πρωτεϊνών και miRNA που δεσμεύουν RNA. Αυτή η μορφή μοριακού συνωστισμού πρωτεϊνικών συστατικών (ελικάσες) με μεγάλη συγγένεια για δέσμευση G4 ( Rouleau et al., 2017) θα μειώσει τον αριθμό των πρωτεϊνών που δεσμεύουν το RNA που δεσμεύουν τα G4 που είναι συνήθως διαθέσιμες για ρύθμιση του miRNA. Αυτή η απώλεια πρωτεϊνών που δεσμεύουν RNA καθώς και η διαθεσιμότητα του miRNA για ρύθμιση μέσω δέσμευσης στα G4s μπορεί να αλλάξει δραματικά τη μεταφραστική ρύθμιση των miRNAs που υπάρχουν στα κύτταρα και ως εκ τούτου να διαταράξει τη βασική ρύθμιση της έκφρασης ογκογονιδίου . Ένα παράδειγμα είναι η εξαρτώμενη από το p16 ρύθμιση της ογκοκατασταλτικής πρωτεΐνης p53 ( Rouleau et al., 2017 ; Al-Khalaf and Aboussekhra, 2018 ).

Αυτή η διαδικασία είναι εξαιρετικά περίπλοκη αλλά ισοδυναμεί με κυτταρική ομοιόσταση . Έτσι, και πάλι, αξίζει να συνοψίσουμε. Εάν τα pG4 συσσωρευτούν, όπως θα αναμενόταν με μια αυξημένη ποσότητα GC στο mRNA του εμβολίου, αυτό θα είχε ως αποτέλεσμα την αύξηση των πιθανών δομών G4 που είναι διαθέσιμες κατά τη διάρκεια των μεταφραστικών συμβάντων και αυτό μπορεί να επηρεάσει τη ρύθμιση του miRNA μετά τη μεταγραφή. Αυτό, με τη σειρά του, είτε θα ευνοούσε τη μεγαλύτερη έκφραση των ογκογονιδίων που σχετίζονται με μια σειρά καρκίνων είτε θα οδηγούσε τα κύτταρα προς την απόπτωση και τον κυτταρικό θάνατο ( Weldon et al., 2018 ). Η μελέτη περίπτωσης που περιγράφηκε νωρίτερα σε αυτό το έγγραφο υποστηρίζει σθεναρά την υπόθεση ότι αυτές οι ενέσεις επάγουν επιταχυνόμενη εξέλιξη του λεμφώματος σε θυλακιώδη Β-κύτταρα ( Goldman et al., 2021 ).

Τα μοτίβα αναγνώρισης δέσμευσης miRNA είναι ατελώς συμπληρωματικά με τις περιοχές-στόχους τους και για αυτόν τον λόγο αναφέρονται ως «κύριοι ρυθμιστές», καθώς ένα miRNA επηρεάζει μια πληθώρα διαφορετικών στόχων ( Rouleau et al., 2018 ). Το πλήθος των pG4 στο mRNA του εμβολίου θα μπορούσε να λειτουργήσει αναμενόμενα ως δόλωμα, αποσπώντας την προσοχή των miRNA από την κανονική τους λειτουργία στη ρύθμιση της έκφρασης της ανθρώπινης πρωτεΐνης. Η αύξηση των στόχων G4 λόγω του εμβολίου θα μείωνε τη διαθεσιμότητα των miRNAs για τη στόχευση των G4 που εκφράζονται στον άνθρωπο για τη ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης. Αυτό μπορεί να οδηγήσει σε μείωση της έκφρασης miRNA που εμπλέκεται στην καρδιαγγειακή παθολογία ( Small and Olson, 2011 ), στην έναρξη του νευροεκφυλισμού ( Abe and Bonini, 2013 ) και/ή στην εξέλιξη του καρκίνου (Farazi et al., 2013 ).

Από τις περισσότερες απόψεις στον επιμεταγραφικό μηχανισμό, τα miRNA εμπλέκονται στην καταστολή της μετάφρασης. Ένα παράδειγμα, ζωτικής σημασίας για την κυτταρική κανονική καθαριότητα, είναι αυτό του ομολόγου διπλού λεπτού 2 του ποντικιού (MDM2), μιας φυσικής αρνητικής ρυθμιστικής πρωτεΐνης της p53. Το ίδιο το P53 θεωρείται ο κύριος ρυθμιστής του δικτύου γονιδίων καταστολής του κυτταρικού όγκου. Το P16 ελέγχει την έκφραση πολλών miRNAs και, μέσω της δέσμευσης των miR-141 και mIR-146b-5p στο mRNA MDM2, επάγει την αρνητική ρύθμιση του MDM2, επιτρέποντας έτσι την ουμπικιτινίωση του p53 και την προώθηση της κυτταρικής επιβίωσης σε συμβάντα βλάβης του DNA ( Al-Khalaf και Aboussekhra, 2018 ). Η απορρύθμιση των miRNAs που ελέγχουν την καταστολή του P53 του MDM2 θα οδηγούσε αναμενόμενα σε αυξημένο κίνδυνο για μια σειρά καρκίνων (Ozaki και Nakagawara, 2011 ).

5 . IFN τύπου Ι και COVID-19

Οι IFN τύπου Ι διαδραματίζουν ουσιαστικό ρόλο στην καταπολέμηση των ιογενών λοιμώξεων και οι ελλείψεις στη σηματοδότηση της IFN τύπου Ι έχουν συσχετιστεί με κακή έκβαση του COVID-19 σε πολλές μελέτες. Αυτές οι περιπτώσεις συχνά συνδέονται με αυτοαντισώματα έναντι IFN τύπου Ι. Όπως ανασκοπείται παρακάτω, οι IFN τύπου Ι έχουν χρησιμοποιηθεί με κάποια επιτυχία στη θεραπεία σοβαρής μορφής COVID-19, ιδιαίτερα εάν χορηγούνται πολύ νωρίς στη διαδικασία της νόσου. Εάν, όπως υποστηρίχθηκε παραπάνω, τα εμβόλια mRNA παρεμβαίνουν στη σηματοδότηση IFN τύπου Ι, αυτό θα μπορούσε να οδηγήσει σε αυξημένη ευαισθησία στον COVID-19 τις δύο εβδομάδες μετά το πρώτο εμβόλιο, πριν ξεκινήσει η απόκριση αντισωμάτων.

Κύτταρα που έχουν μολυνθεί με έναν ιό ανιχνεύουν την παρουσία αντιγραφής του ιού μέσω ενός αριθμού υποδοχέων αναγνώρισης προτύπων (PRRs), οι οποίοι χρησιμεύουν ως φρουροί που ανιχνεύουν ανώμαλες δομές RNA που συχνά σχηματίζονται κατά τη διάρκεια της ιικής αντιγραφής. Αυτοί οι υποδοχείς ανταποκρίνονται ολιγομερίζοντας και στη συνέχεια επάγοντας IFN τύπου Ι, ρυθμίζοντας τελικά έναν μεγάλο αριθμό πρωτεϊνών που εμπλέκονται στην καταστολή του ιικού πολλαπλασιασμού ( Janeway and Medzhitov, 2002 ).

Μια μελέτη πολλών συγγραφέων από ερευνητές στο Παρίσι της Γαλλίας, στην οποία συμμετείχαν μια ομάδα 50 ασθενών με COVID-19 με διάφορους βαθμούς σοβαρότητας της νόσου, αποκάλυψε ότι οι ασθενείς με σοβαρή νόσο χαρακτηρίζονταν από μια εξαιρετικά εξασθενημένη απόκριση IFN τύπου Ι ( Hadjadj et al., 2020 ). Αυτοί οι ασθενείς ουσιαστικά δεν είχαν IFN-β και χαμηλή παραγωγή και δραστηριότητα IFN-α. Αυτό συσχετίστηκε με ένα επίμονο ιικό φορτίο αίματος και μια επιδεινωμένη φλεγμονώδη απόκριση, που χαρακτηρίζεται από υψηλά επίπεδα παράγοντα νέκρωσης όγκου α(TNF-α) και Il-6. Οι συγγραφείς πρότειναν τη θεραπεία με IFN τύπου Ι ως πιθανή θεραπευτική επιλογή. Μια εργασία πολλών ερευνητών στις Ηνωμένες Πολιτείες εντόπισε επίσης μια μοναδική και ακατάλληλη φλεγμονώδη απόκριση σε ασθενείς με σοβαρή COVID-19, που χαρακτηρίζεται από χαμηλά επίπεδα IFN τύπου Ι και τύπου III μαζί με αυξημένες χημειοκίνες και αυξημένη έκφραση της Il-6 ( Blanco- Melo et al., 2020 ).

Οι IFN τύπου Ι έχουν προταθεί ακόμη και ως θεραπευτική επιλογή για σοβαρό COVID-19. Σε ένα μοντέλο χάμστερ , οι ερευνητές εξέθεσαν χάμστερ στον SARS-CoV-2 και προκάλεσαν φλεγμονώδη απόκριση στους πνεύμονες και συστηματική φλεγμονή στους απομακρυσμένους ιστούς. Βρήκαν ότι η ενδορινική χορήγηση ανασυνδυασμένης IFN-α είχε ως αποτέλεσμα μειωμένο ιικό φορτίο και ανακούφιση των συμπτωμάτων ( Hoagland et al., 2021 ). Μια αναδρομική μελέτη κοόρτης σε 446 ασθενείς με COVID-19 προσδιόρισε ότι η πρώιμη χορήγηση της IFN-α2b συσχετίστηκε με μειωμένη ενδονοσοκομειακή θνησιμότητα. Ωστόσο, η όψιμη θεραπεία με IFN αύξησε τη θνησιμότητα και καθυστέρησε την ανάρρωση, αποκαλύπτοντας ότι η έγκαιρη χορήγηση θεραπείας με ιντερφερόνη είναι απαραίτητη για μια ευνοϊκή απόκριση ( Wang et al., 2020a ).

Ένας εκπληκτικός αριθμός ανθρώπων έχει εξουδετερωτικά αυτοαντισώματα έναντι IFN τύπου Ι, αν και η υποκείμενη αιτιολογία αυτού του φαινομένου δεν είναι κατανοητή. Μια μελέτη που χρησιμοποιεί διαχρονικό προφίλ για περισσότερα από 600.000 μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος και αλληλουχία μεταγραφών από 54 ασθενείς με COVID-19 και 26 ελέγχους βρήκε αξιοσημείωτη έλλειψη γονιδιακών αποκρίσεων διεγερμένων από IFN τύπου Ι σε μυελοειδή κύτταρα από ασθενείς με κρίσιμη νόσο ( van der Wijst et. al., 2021 ). Εξουδετερωτικά αυτοαντισώματα έναντι IFN τύπου Ι βρέθηκαν στο 19% των ασθενών με κρίσιμη νόσο, στο 6% των ασθενών με σοβαρή νόσο και στο 0% των ασθενών με μέτρια νόσο. Μια άλλη μελέτη με έδρα τη Μαδρίτη της Ισπανίας αποκάλυψε ότι το 10% των ασθενών με σοβαρή νόσο COVID-19 είχαν αυτοάνοσα αντισώματα στις IFN τύπου Ι (Troya et al., 2021 ). Μια μελέτη πολλών συγγραφέων με έδρα τη Γαλλία διαπίστωσε ότι η θνησιμότητα από τον COVID-19 ήταν σημαντικά πιο συχνή σε ασθενείς με εξουδετερωτικά αυτοαντισώματα έναντι της ιντερφερόνης τύπου Ι σε σχέση με αυτούς χωρίς εξουδετερωτικά αντισώματα (55% έναντι 23%) ( Shauvineau - Grenier et al., 2022 ). . Τέλος, οι Stertz και Hale (2021) σημειώνουν ότι, είτε λόγω αυτοαντισωμάτων είτε λόγω πολυμορφισμών απώλειας της λειτουργίας που σχετίζονται με γονίδια του συστήματος ιντερφερόνης, οι ελλείψεις στην παραγωγή ιντερφερόνης σχετίζονται με έως και 15% όλων των απειλητικών για τη ζωή περιπτώσεων COVID-19. .

6. Γενικά παραλείπονται οι στρατηγικές μεθυλίωσης για την κυτταρική καθαριότητα από τα mRNA των εμβολίων;

Η μεθυλίωση των mRNAs έχει επινοηθεί εξελικτικά για τον έλεγχο της μετάφρασης των μεταγραφών και επομένως της έκφρασης γονιδίων από έναν σύνθετο καταρράκτη μεθυλοποιητή (εγγραφείς), απομεθυλιωτή (γόμα) και πρωτεϊνών ανάγνωσης. Η μεθυλίωση της αδενοσίνης είναι η πιο άφθονη επιμεταγραφική τροποποίηση του mRNA και εμφανίζεται σε πολλαπλές θέσεις σε όλο το μόριο mRNA ( Zaccara et al., 2019 ). Μια βασική μεθυλίωση της αδενοσίνης "N6-methyladenosine (m6A)" ειδικά στο 5' UTR των mRNAs ρυθμίζει τη φυσιολογική κυτταρική φυσιολογία , τη φλεγμονώδη απόκριση και την εξέλιξη του καρκίνου. Ο ρόλος και οι μηχανισμοί του m6A στην ανθρώπινη ασθένεια είναι εκτενής και καλύπτεται άριστα σε άλλες περιεκτικές ανασκοπήσεις ( Yang et al., 2020 ; Knuckles and Bühler, 2018). Το κυριότερο από αυτά, ο μοριακός εμβολιασμός SARS-CoV-2 προκαλεί συνθήκες κυτταρικού στρες, όπως περιγράφεται από την αυξημένη σηματοδότηση NF-κB μετά τον εμβολιασμό ( Liu et al., 2021 ; Koo et al., 2010 ).

Υπό συνθήκες κυτταρικού στρες, το οποίο μπορεί να προκληθεί από ιογενή λοίμωξη ή καταστάσεις ασθένειας όπως ο καρκίνος, το m6A μεσολαβεί στα mRNA για να υποστούν μετάφραση κατά προτίμηση με τρόπο ανεξάρτητο από το καπάκι ( Meyer et al., 2015 ). Όπως συζητήθηκε προηγουμένως, αυτό είναι αντίθετο με τον αντίκτυπο του εμβολιασμού mRNA SARS-CoV-2, ο οποίος οδηγεί τα κύτταρα σε μετάφραση που εξαρτάται από το καπάκι . Επιπλέον, υπό διαφοροποιημένες συνθήκες κυτταρικού στρες, υπάρχει μια συντριπτική επαγωγή προσθήκης m6A σε όλο το μεταγραφικό σώμα που προκαλεί αυξημένο αριθμό mRNA να διαθέτει 5'UTRs εμπλουτισμένα με m6A ( Meyer et al., 2015 ).

Ο ευκαρυωτικός παράγοντας έναρξης μετάφρασης 4Ε (eIF4E) είναι η αρχική πρωτεΐνη που δεσμεύει το καπάκι του mRNA που κατευθύνει τα ριβοσώματα στη δομή καπακιού των mRNAs, προκειμένου να ξεκινήσει η μετάφραση σε πρωτεΐνη. Η εξάρτηση από την εξαρτώμενη από το καπάκι μετάφραση των mRNA του εμβολίου θα καταναλώσει ένα πλεόνασμα διαθεσιμότητας eIF4E που απαιτείται για τη μετάφραση ενός αφύσικα μεγάλου αριθμού συνθετικών mRNAs. Ωστόσο, η μετάφραση ανεξάρτητη από το καπάκι πραγματοποιείται χωρίς να απαιτείται η δέσμευση του eIF4E με το eIF4F . Ο ανταγωνισμός για τα ριβοσώματα θα στραφεί προς την ανεξάρτητη από το καπάκι μετάφραση των μεταγραφών, καθώς τα mRNA που υφίστανται μετάφραση ανεξάρτητη από το καπάκι είναι εξοπλισμένα, εκτός από τις εσωτερικές θέσεις εισόδου ριβοσώματος (IRES), με ειδικά μοτίβα δέσμευσης που συνδέονται με παράγοντες που στρατολογούν ενεργά mRNA στο ανεξάρτητοι μεταφραστικοί ενισχυτές ριβοσώματος (CITEs) (Shatsky et al., 2018 ).

Επιπλέον, αυτό σημαίνει επίσης ότι το eIF4E, το οποίο είναι ένας ισχυρός ρυθμιστής ογκογονιδίου και ρυθμιστής πολλαπλασιασμού κυττάρων , θα διατηρήσει τις δραστηριότητές του από αυτόν τον ανταγωνισμό για αφύσικα παρατεταμένη χρονική περίοδο, προσπαθώντας να εξισορροπήσει τον ανταγωνισμό μεταξύ των mRNAs με ισχυρή κάλυψη στα εμβόλια και του IRES που περιέχουν mRNAs ( Kyriakopoulos and McCullough, 2021 , Svitkin et al., 2005 ). Αυτός ο τύπος κατάστασης οδηγεί σε απορύθμιση των συν-μεταγραφικών τροποποιήσεων m6A mRNA και συνδέεται σοβαρά με μοριακές προόδους διαφόρων καρκίνων ( Han and Choe, 2020 ), καθώς και στη δημιουργία προδιαθεσικών συνθηκών για επακόλουθες ιογενείς λοιμώξεις ( Svitkin et al., 2005 ).

Στη συνέχεια εξετάζουμε τον αντίκτυπο της γλυκοπρωτεΐνης ακίδας SARS-CoV-2 που προέρχεται από τον εμβολιασμό mRNA στο κυτταρικό σύστημα IFN μέσω της μαζικής παραγωγής εξωσωμάτων.

7. Εξωσώματα και MicroRNA

Ένα σημαντικό δίκτυο επικοινωνίας μεταξύ των κυττάρων αποτελείται από εξωκυτταρικά κυστίδια (EVs) που απελευθερώνονται συνεχώς από ένα κύτταρο και αργότερα προσλαμβάνονται από ένα άλλο κύτταρο, το οποίο θα μπορούσε να βρίσκεται σε ένα απομακρυσμένο όργανο. Μικρά κυστίδια γνωστά ως εξωσώματα, που σχηματίζονται μέσα στα ενδοσώματα, είναι παρόμοια σε μέγεθος με τους ιούς και απελευθερώνονται μέσω εξωκυττάρωσης στον εξωκυτταρικό χώρο για να κυκλοφορήσουν στη συνέχεια σε όλο το σώμα ( Yoshikawa et al., 2019 ). Τα εξωσώματα μπορούν να παραδώσουν μια ποικίλη συλλογή βιολογικά ενεργών μορίων, συμπεριλαμβανομένων mRNA, microRNAs (miRNAs), πρωτεϊνών και λιπιδίων ( Ratajczak and Ratajczak, 2016 ). Κατά τη διάρκεια μιας ιογενούς μόλυνσης, τα μολυσμένα κύτταρα εκκρίνουν μεγάλες ποσότητες εξωσωμάτων που λειτουργούν ως δίκτυο επικοινωνίας μεταξύ των κυττάρων για να ενορχηστρώσουν την απόκριση στη μόλυνση (Chahar et al., 2015 ).

Σε μια συλλογική προσπάθεια από μια ομάδα ερευνητών από την Αριζόνα και το Κονέκτικατ, διαπιστώθηκε ότι άτομα που εμβολιάστηκαν με τα εμβόλια mRNA απέκτησαν κυκλοφορούντα εξωσώματα που περιέχουν τη γλυκοπρωτεΐνη ακίδας SARS-CoV-2 την ημέρα 14 μετά τον εμβολιασμό ( Bansal et al., 2021). Διαπίστωσαν επίσης ότι δεν υπήρχαν κυκλοφορούντα αντισώματα κατά της γλυκοπρωτεΐνης ακίδας δεκατέσσερις ημέρες μετά το πρώτο εμβόλιο. Μετά το δεύτερο εμβόλιο, ωστόσο, ο αριθμός των κυκλοφορούντων εξωσωμάτων που περιέχουν ακίδα-γλυκοπρωτεΐνη αυξήθηκε κατά έναν παράγοντα 12. Επιπλέον, τα αντισώματα εμφανίστηκαν για πρώτη φορά την ημέρα 14. Τα εξωσώματα παρουσίασαν γλυκοπρωτεΐνη ακίδας στην επιφάνειά τους, η οποία, όπως υποστήριξαν οι συγγραφείς, διευκόλυνε την παραγωγή αντισωμάτων. Όταν τα ποντίκια εκτέθηκαν σε εξωσώματα που προέρχονται από εμβολιασμένα άτομα, ανέπτυξαν αντισώματα κατά της γλυκοπρωτεΐνης ακίδας. Είναι ενδιαφέρον ότι μετά τη μέγιστη έκφραση, ο αριθμός των κυκλοφορούντων εξωσωμάτων που περιέχουν ακίδα-γλυκοπρωτεΐνη μειώθηκε με την πάροδο του χρόνου, παράλληλα με τη μείωση του επιπέδου των αντισωμάτων στη γλυκοπρωτεΐνη ακίδας.

Τα εξωσώματα υπάρχουν ως μέρος του μηχανισμού διάσπασης του mRNA σε στενή σχέση υπό συνθήκες στρες με κόκκους στρες (SGs) και P-bodies (PBs) ( Decker and Parker, 2012 ; Kothandan et al., 2020 ). Υπό συνθήκες μετάφρασης που προκαλείται από το εμβόλιο mRNA, η οποία θα μπορούσε να ονομαστεί «υπερβολική εξάρτηση από τη μετάφραση που εξαρτάται από το καπάκι», υπάρχει μια προφανής αντίσταση στην προώθηση και τη συναρμολόγηση του μεγάλου συμπλέγματος αποκάλυψης ( Kyriakopoulos and McCullough, 2021 ) και επομένως αντίσταση κατά φυσιολογικές διεργασίες διάσπασης του mRNA ( Decker and Parker, 2012). Αυτό θα σήμαινε ότι η μοίρα συγκεκριμένων συνθετικών mRNA που διαφορετικά θα καθοριζόταν από την κοινή κυτταρική στρατηγική για τον κύκλο εργασιών mRNA που περιλαμβάνει αγγελιοφόρους ριβονουκλεϊνοπρωτεΐνες (mRNPs) παραλείπεται ( Borbolis and Syntichaki, 2015 ).

Επιπλέον, υπό συνθήκες υπερβολικής εξάρτησης από την εξαρτώμενη από το καπάκι μετάφραση από τα συνθετικά mRNA στα εμβόλια SARS-CoV-2 ( Kyriakopoulos and McCullough, 2021 ), πολλά εγγενή mRNA που διαθέτουν σημαντικό IRES και συγκεκριμένες μεθυλώσεις (m6A) στη δομή τους θα επιλέξουν ευνοϊκά μετάφραση ανεξάρτητη από το καπάκι, η οποία συνδέεται στενά με τους μηχανισμούς ποιοτικού ελέγχου της διάσπασης του mRNA ( Han and Choe, 2020 ). Υπό αυτή την έννοια, σημαντικά αποαδενυλιωμένα προϊόντα mRNA καθώς και προϊόντα που προέρχονται από το μεταβολισμό του mRNA (αποσύνθεση) συνδέονται άμεσα με φορτία εξωσώματος ( Borbolis and Syntichaki, 2015 ).

Ένα παράδειγμα εξάρτησης από την εξαρτώμενη από το καπάκι μετάφραση περιγράφεται στην οξεία λεμφοβλαστική λευχαιμία των Τ-κυττάρων (T-ALL). Λόγω του μηχανιστικού στόχου της υπερλειτουργίας της ραπαμυκίνης C (mTORC)-1 στην T-ALL, τα κύτταρα οδηγούνται πλήρως προς την εξαρτώμενη από το καπάκι μετάφραση ( Girardi and De Keersmaecker, 2015 ). Μια ανάλογη κατάσταση περιγράφεται από τους Kyriakopoulos and McCullough (2021) . Ακόμη και σε αυτήν την εξαιρετικά επιθετική καρκινική κατάσταση, κατά τη διάρκεια της αναστολής της εξαρτώμενης από το καπάκι μετάφρασης στα κύτταρα Τ-ALL, υπάρχει μια ταχεία αναστροφή στην ανεξάρτητη από το καπάκι μετάφραση ( Girardi and De Keersmaecker, 2015 ). Παρομοίως, μια μόλυνση από τον πικορναϊό ( Jang et al., 1990) οδηγεί τα κύτταρα σε μετάφραση ανεξάρτητη από το καπάκι λόγω της αναστολής των συστατικών του συμπλέγματος eIF4F και του πλουραλισμού του IRES στο ιικό RNA .

Στους ανθρώπους, υπάρχει πληθώρα κυρίως ασυμπτωματικών λοιμώξεων από τον πικορναϊό, όπως ο ιός Safford, με οροεπιπολασμό πάνω από 90% σε μικρά παιδιά και ενήλικες ( Zol et al., 2009 ). Σε κάθε περίπτωση, είτε πρόκειται για αποπτωτικό συμβάν λόγω μιας κατάστασης που μοιάζει με στρες ( Rusk, 2008 ) είτε για καρκινωματικό αποτέλεσμα που μοιάζει με καπάκι mRNA ( De Paolis et al., 2021 ), τα επίπεδα miRNA θα αυξηθούν λόγω αυξημένη επιμεταγραφική λειτουργία και ενισχυμένη αποσύνθεση του mRNA. Λόγω της υψηλής ζήτησης για έκφραση γονιδίων, υψηλά επίπεδα ορισμένων miRNAs αναμένεται να περιέχονται σε εξωσώματα μέσω σωμάτων P ( Yu et al., 2016 ).

Επίσης, υπό συνθήκες συντριπτικής παραγωγής γλυκοπρωτεΐνης ακίδας SARS-CoV-2 λόγω μοριακού εμβολιασμού SARS-CoV-2, θα ήταν φυσικά αναμενόμενο ότι ένα σημαντικό ποσοστό υπεράφθονων ενδοκυτταρικών γλυκοπρωτεϊνών ακίδας θα εξάγεται επίσης μέσω φορτίων εξωσώματος. Wei et al., 2021 ).

Οι Mishra και Banerjea (2021) ερεύνησαν τον ρόλο των εξωσωμάτων στην κυτταρική απόκριση των κυττάρων που έχουν επιμολυνθεί με ακίδα SARS-CoV-2. Έγραψαν περιληπτικά:

«Προτείνουμε ότι το προϊόν γονιδίου SARS-CoV-2, το Spike, μπορεί να τροποποιήσει το εξωσωματικό φορτίο του ξενιστή, το οποίο μεταφέρεται σε απομακρυσμένους μη μολυσμένους ιστούς και όργανα και μπορεί να προκαλέσει έναν καταστροφικό ανοσολογικό καταρράκτη στο Κεντρικό Νευρικό Σύστημα (ΚΝΣ).

Τα πειράματά τους περιελάμβαναν την ανάπτυξη ανθρώπινων κυττάρων HEK293T σε καλλιέργεια και την έκθεσή τους σε πλασμίδια γονιδίου ακίδας SARS-CoV-2, τα οποία προκάλεσαν σύνθεση γλυκοπρωτεΐνης ακίδας μέσα στα κύτταρα. Βρήκαν πειραματικά ότι αυτά τα κύτταρα απελευθέρωσαν άφθονα εξωσώματα που φιλοξενούσαν γλυκοπρωτεΐνη ακίδας μαζί με συγκεκριμένα microRNA. Στη συνέχεια συγκέντρωσαν τα εξωσώματα και τα μετέφεραν σε μια κυτταρική καλλιέργεια ανθρώπινης μικρογλοίας (τα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος που βρίσκονται στον εγκέφαλο). Έδειξαν ότι η μικρογλοία προσέλαβε εύκολα τα εξωσώματα και ανταποκρίθηκε στα microRNA ξεκινώντας μια οξεία φλεγμονώδη απόκριση. Ο ρόλος της μικρογλοίας στην πρόκληση νευροφλεγμονής σε διάφορες ιογενείς ασθένειες, όπως ο ιός της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV), ο ιός της ιαπωνικής εγκεφαλίτιδας (JEV) και ο δάγκειος πυρετός, είναι καλά καθιερωμένο. Πρότειναν ότι η επικοινωνία κυττάρου-κυττάρου σε μεγάλη απόσταση μέσω εξωσωμάτων θα μπορούσε να είναι ο μηχανισμός με τον οποίο εκδηλώνονται νευρολογικά συμπτώματα σε σοβαρές περιπτώσεις COVID-19.

Σε περαιτέρω εξερεύνηση, οι συγγραφείς εντόπισαν δύο microRNA που υπήρχαν σε υψηλές συγκεντρώσεις στα εξωσώματα: miR-148a και miR-590. Πρότειναν έναν συγκεκριμένο μηχανισμό με τον οποίο αυτά τα δύο microRNA θα διαταράσσουν ειδικά τη σηματοδότηση της ιντερφερόνης τύπου Ι , μέσω της καταστολής δύο κρίσιμων πρωτεϊνών που ελέγχουν το μονοπάτι: της ειδικής πεπτιδάσης 33 της ουβικιτίνης (USP33) και της IRF9 Φωσφορυλιωμένα ετεροδιμερή STAT1 και STAT2απαιτούν IRF9 για να δεσμεύουν στοιχεία απόκρισης που διεγείρονται από IFN και επομένως το IRF9 παίζει ουσιαστικό ρόλο στην απόκριση σηματοδότησης. Οι συγγραφείς έδειξαν πειραματικά ότι τα μικρογλοία που εκτέθηκαν στα εξωσώματα που εξήχθησαν από την καλλιέργεια HEK293 είχαν 50% μείωση στην κυτταρική έκφραση του USP33 και 60% μείωση στο IRF9. Διαπίστωσαν περαιτέρω ότι το miR-148a μπλοκάρει συγκεκριμένα το USP33 και το miR-590 μπλοκάρει συγκεκριμένα το IRF9. Το USP33 αφαιρεί την ουβικιτίνη από το IRF9 και με αυτόν τον τρόπο την προστατεύει από την υποβάθμιση. Έτσι, τα δύο microRNA μαζί συνωμοτούν για να παρεμβαίνουν στο IRF9, εμποδίζοντας έτσι την απόκριση του υποδοχέα στις ιντερφερόνες τύπου Ι.

Μια μελέτη από τους de Gonzalo-Calvo et al. (2021) εξέτασε το προφίλ microRNA στο αίμα ασθενών με COVID-19 και την ποσοτική τους διακύμανση με βάση τη σοβαρότητα της νόσου. Πολλαπλά miRNA βρέθηκαν να ρυθμίζονται προς τα πάνω και προς τα κάτω. Μεταξύ αυτών ήταν το miR-148a-3p, ο πρόδρομος της δέσμης οδηγών του miR-148a. Ωστόσο, το ίδιο το miR-148a δεν ήταν μεταξύ των microRNA που καταγράφηκαν ως υπερβολικά ή ελλιπή στη μελέτη τους, ούτε το miR-590. Φαίνεται από αυτά τα ευρήματα ότι τα miR148a και miR-590 και οι φλεγμονώδεις επιδράσεις τους είναι μοναδικά στην προκαλούμενη από τον εμβολιασμό παραγωγή ακίδας γλυκοπρωτεΐνης SARS-CoV-2.

Μελέτες ιχνηθέτη έχουν δείξει ότι, μετά την έγχυση στον μυ του βραχίονα, το mRNA στα εμβόλια mRNA μεταφέρεται στο λεμφικό σύστημα από τα ανοσοκύτταρα και τελικά συσσωρεύεται στον σπλήνα σε υψηλές συγκεντρώσεις ( Bahl et al., 2017 ). Άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι τα στρεσογόνα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος στα βλαστικά κέντρα του σπλήνα απελευθερώνουν μεγάλες ποσότητες εξωσωμάτων που ταξιδεύουν στους πυρήνες του εγκεφαλικού στελέχους κατά μήκος του πνευμονογαστρικού νεύρου (όπως εξετάζεται στο Seneff and Nigh (2021) ). Το πνευμονογαστρικό νεύρο είναι το 10ο κρανιακό νεύρο και εισέρχεται στο εγκεφαλικό στέλεχος κοντά στον λάρυγγα. Τα άνω και υποτροπιάζοντα λαρυγγικά νεύρα είναι κλάδοι του πνευμονογαστρικού που νευρώνουν τις δομές που εμπλέκονται στην κατάποση και την ομιλία. Οι βλάβες σε αυτά τα νεύρα προκαλούν παράλυση των φωνητικών χορδώνσχετίζεται με δυσκολία στην κατάποση (δυσφαγία), δυσκολία στην ομιλία (δυσφωνία) και/ή δύσπνοια (δύσπνοια) ( Gould et al., 2019 · Erman et al., 2009 ). Θα επιστρέψουμε σε αυτές τις συγκεκριμένες παθολογίες στην ανασκόπηση των δεδομένων VAERS παρακάτω.

Τα κύτταρα HEK293 προήλθαν αρχικά από καλλιέργειες που ελήφθησαν από νεφρό ανθρώπινου εμβρύου πριν από αρκετές δεκαετίες και απαθανατίστηκαν μέσω μόλυνσης με DNA αδενοϊού . Ενώ εξήχθησαν από το νεφρό, τα κύτταρα δείχνουν μέσω του προφίλ έκφρασης πρωτεΐνης τους ότι είναι πιθανό να είναι νευρωνικής προέλευσης ( Shaw et al., 2002 ). Αυτό υποδηλώνει ότι οι νευρώνες στο πνευμονογαστρικό νεύρο θα ανταποκρίνονταν παρόμοια στη γλυκοπρωτεΐνη ακίδας SARS-CoV-2. Έτσι, τα διαθέσιμα στοιχεία υποδηλώνουν σθεναρά ότι η ενδογενώς παραγόμενη γλυκοπρωτεΐνη ακίδας SARS-CoV-2 δημιουργεί διαφορετικό προφίλ microRNA από τη φυσική μόλυνση με SARS-CoV-2 και αυτές οι διαφορές συνεπάγονται ένα δυνητικά ευρύ φάσμα επιβλαβών επιπτώσεων.

Ένα κεντρικό σημείο της ανάλυσής μας παρακάτω είναι η σημαντική διάκριση μεταξύ της επίδρασης του εμβολιασμού έναντι της φυσικής μόλυνσης στην IFN τύπου Ι. Ενώ ο εμβολιασμός καταστέλλει ενεργά την παραγωγή του, η φυσική μόλυνση προάγει την παραγωγή IFN τύπου Ι πολύ νωρίς στον κύκλο της νόσου. Τα άτομα με προϋπάρχουσες παθήσεις συχνά παρουσιάζουν εξασθενημένη σηματοδότηση IFN τύπου Ι, η οποία οδηγεί σε πιο σοβαρό, κρίσιμο, ακόμη και θανατηφόρο COVID-19. Εάν η βλάβη που προκαλείται από το εμβόλιο διατηρηθεί καθώς τα επίπεδα αντισωμάτων μειώνονται με την πάροδο του χρόνου, αυτό θα μπορούσε να οδηγήσει σε μια κατάσταση όπου το εμβόλιο προκαλεί μια πιο σοβαρή έκφραση της νόσου από ό,τι θα συνέβαινε απουσία του εμβολίου.

Μια άλλη αναμενόμενη συνέπεια της καταστολής της IFN τύπου Ι θα ήταν η επανενεργοποίηση προϋπαρχουσών, χρόνιων ιογενών λοιμώξεων, όπως περιγράφεται στην Ενότητα 9 .

8. Μειωμένη επισκευή DNA και προσαρμοστική ανοσία

Το ανοσοποιητικό σύστημα και το σύστημα επιδιόρθωσης DNA είναι τα δύο κύρια συστήματα στα οποία βασίζονται οι ανώτεροι οργανισμοί για την άμυνα έναντι διαφόρων απειλών και μοιράζονται κοινά στοιχεία. Η απώλεια της λειτουργίας των βασικών πρωτεϊνών επιδιόρθωσης του DNA οδηγεί σε ελαττώματα στην επισκευή που αναστέλλουν την παραγωγή λειτουργικών Β- και Τ-κυττάρων, με αποτέλεσμα ανοσοανεπάρκεια. Η επιδιόρθωση μη ομόλογης σύνδεσης άκρου (NHEJ) παίζει κρίσιμο ρόλο στον ειδικό για λεμφοκύτταρα ανασυνδυασμό V(D)J, ο οποίος είναι απαραίτητος για την παραγωγή του εξαιρετικά διαφορετικού ρεπερτορίου αντισωμάτων Β-κυττάρων ως απόκριση στην έκθεση σε αντιγόνο ( Jiang and Mei, 2021 ). . Η εξασθενημένη επιδιόρθωση του DNA είναι επίσης μια άμεση οδός προς τον καρκίνο.

Μια εργασία που δημοσιεύτηκε από τους Liu et al., το 2021 παρακολούθησε διάφορες παραμέτρους που σχετίζονται με την ανοσοποιητική λειτουργία σε μια ομάδα ασθενών διενεργώντας αλληλουχία mRNA μονοκυττάρου μονοπύρηνων κυττάρων περιφερικού αίματος (PBMCs) που συλλέγονται από τους ασθενείς πριν και 28 ημέρες μετά την πρώτη ένεση. ενός εμβολίου COVID-19 που βασίζεται σε μια εξασθενημένη εκδοχή του ιού ( Liu et al., 2021 ). Ενώ αυτά τα εμβόλια είναι διαφορετικά από τα εμβόλια mRNA, λειτουργούν επίσης με την έγχυση του περιεχομένου του εμβολίου στον δελτοειδή μυ, παρακάμπτοντας τους βλεννογονικούς και αγγειακούς φραγμούς. Οι συγγραφείς βρήκαν σταθερή μεταβολή της γονιδιακής έκφρασης μετά τον εμβολιασμό σε πολλούς διαφορετικούς τύπους ανοσοκυττάρων. Παρατηρήθηκαν αυξήσεις στη σηματοδότηση NF-κB και μειωμένη IFN τύπου Ιοι αποκρίσεις επιβεβαιώθηκαν περαιτέρω με βιολογικές αναλύσεις. Σε συμφωνία με άλλες μελέτες, διαπίστωσαν ότι οι STAT2 και IRF7 είχαν μειωθεί σημαντικά 28 ημέρες μετά τον εμβολιασμό, ενδεικτικό της μειωμένης απόκρισης IFN τύπου Ι. Έγραψαν: «Μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι μετά τον εμβολιασμό, τουλάχιστον την 28η ημέρα, εκτός από τη δημιουργία εξουδετερωτικών αντισωμάτων , το ανοσοποιητικό σύστημα των ανθρώπων, συμπεριλαμβανομένων αυτών των λεμφοκυττάρων και των μονοκυττάρων , ήταν ίσως σε πιο ευάλωτη κατάσταση». ( Liu et al., 2021 ).

Αυτοί οι συγγραφείς εντόπισαν επίσης ανησυχητικές αλλαγές στη γονιδιακή έκφραση που θα συνεπάγονταν μειωμένη ικανότητα επιδιόρθωσης του DNA. Έως και το 60% της συνολικής μεταγραφικής δραστηριότητας στα αναπτυσσόμενα κύτταρα περιλαμβάνει τη μεταγραφή του ριβοσωμικού DNA (rDNA) για την παραγωγή ριβοσωμικού RNA (rRNA). Το ένζυμο που μεταγράφει το ριβοσωμικό DNA σε RNA είναι η RNA πολυμεράση Ι (Pol I). Το Pol I παρακολουθεί επίσης την ακεραιότητα του rDNA και επηρεάζει την κυτταρική επιβίωση ( Kakarougkas et al., 2013 ). Κατά τη διάρκεια της μεταγραφής, οι πολυμεράσες RNA (RNAPs) σαρώνουν ενεργά το DNA για να βρουν ογκώδεις βλάβες (σπασίματα διπλού κλώνου) και να ενεργοποιήσουν την επισκευή τους. Στα αναπτυσσόμενα ευκαρυωτικά κύτταρα, το μεγαλύτερο μέρος της μεταγραφής περιλαμβάνει σύνθεση ριβοσωμικού RNA από το Pol I. Έτσι, το Pol I προάγει την επιβίωση μετά από βλάβη του DNA ( Kakarougkas et al., 2013). Πολλά από τα υπορυθμισμένα γονίδια που ταυτοποιήθηκαν από τους Liu et al. (2021) συνδέθηκαν με τον κυτταρικό κύκλο, τη συντήρηση των τελομερών και το άνοιγμα και τη μεταγραφή του προαγωγέα της POL I, ενδεικτικά των διαταραχών επισκευής του DNA.

Ένα από τα σύνολα γονιδίων που κατεστάλησαν οφειλόταν στην «απόθεση νέας CENPA [πρωτεΐνης κεντρομερούς Α] που περιέχει νουκλεοσώματα στο κεντρομερίδιο». Το πρόσφατα συντιθέμενο CENPA εναποτίθεται σε νουκλεοσώματα στο κεντρομερίδιο κατά τη διάρκεια της όψιμης τελοφάσης/πρώιμης φάσης G1 του κυτταρικού κύκλου. Αυτό δείχνει τη διακοπή του κυτταρικού κύκλου στη φάση G1 ως χαρακτηριστικό γνώρισμα της απόκρισης στο αδρανοποιημένο εμβόλιο SARS-CoV-2. Η σύλληψη πολυδύναμων εμβρυϊκών βλαστοκυττάρων στη φάση G1 (πριν από την έναρξη της αντιγραφής) θα είχε ως αποτέλεσμα εξασθενημένη αυτοανανέωση και διατήρηση της πολυδυναμίας ( Choi et al., 2013 ).

Δύο πρωτεΐνες σημείου ελέγχου που εμπλέκονται καθοριστικά στην επιδιόρθωση του DNA και την προσαρμοστική ανοσία είναι οι BRCA1 και 53BP1, οι οποίες διευκολύνουν τόσο τον ομόλογο ανασυνδυασμό (HR) όσο και το NHEJ, τις δύο κύριες διαδικασίες επιδιόρθωσης ( Zang and Powell, 2005 ; Panier and Boulton, 2014 ). Σε ένα πείραμα in vitro σε ανθρώπινα κύτταρα, η γλυκοπρωτεΐνη ακίδας πλήρους μήκους SARS-CoV-2 αποδείχθηκε ειδικά ότι εισέρχεται στον πυρήνα και παρεμποδίζει τη στρατολόγηση αυτών των δύο πρωτεϊνών επισκευής στη θέση ενός σπασίματος διπλού κλώνου ( Jiang and Mei, 2021). Οι συγγραφείς συνόψισαν τα ευρήματά τους λέγοντας: «Μηχανιστικά, διαπιστώσαμε ότι η πρωτεΐνη ακίδας εντοπίζεται στον πυρήνα και αναστέλλει την επιδιόρθωση της βλάβης του DNA εμποδίζοντας τη στρατολόγηση της βασικής πρωτεΐνης επισκευής DNA BRCA1 και 53BP1 στο σημείο της βλάβης».

Ένας άλλος μηχανισμός με τον οποίο τα εμβόλια mRNA θα μπορούσαν να παρέμβουν στην επισκευή του DNA είναι μέσω του miR-148. Αυτό το microRNA έχει αποδειχθεί ότι ρυθμίζει προς τα κάτω το HR στη φάση G1 του κυτταρικού κύκλου ( Choi et al., 2014 ). Όπως αναφέρθηκε νωρίτερα σε αυτό το άρθρο, αυτό ήταν ένα από τα δύο microRNA που βρέθηκαν σε εξωσώματα που απελευθερώθηκαν από ανθρώπινα κύτταρα μετά τη σύνθεση γλυκοπρωτεϊνών ακίδων SARS-CoV-2 στα πειράματα των Mishra και Banerjea (2021) .

9. Επανενεργοποίηση ανεμευλογιάς-ζωστήρα

Η σηματοδότηση του υποδοχέα IFN τύπου Ι σε κύτταρα CD8 + Τ είναι κρίσιμη για τη δημιουργία κυττάρων τελεστών και μνήμης ως απόκριση σε ιογενή μόλυνση ( Kolumam et al., 2005 ). Τα CD8 Τ κύτταρα μπορούν να εμποδίσουν την επανενεργοποίηση της λανθάνουσας λοίμωξης από έρπη σε αισθητήριους νευρώνες ( Liu et al., 2000 ). Εάν η σηματοδότηση της IFN τύπου I είναι εξασθενημένη, όπως συμβαίνει μετά τον εμβολιασμό αλλά όχι μετά από φυσική μόλυνση με SARS-CoV-2, η ικανότητα των κυττάρων CD8 + T να κρατούν τον έρπη υπό έλεγχο θα μειωθεί επίσης. Ίσως αυτός είναι ο μηχανισμός που λειτουργεί ως απάντηση στα εμβόλια;

Ο έρπητας ζωστήρας είναι μια ολοένα και πιο συχνή πάθηση που προκαλείται από την επανενεργοποίηση του λανθάνοντος ιού του έρπητα ζωστήρα (HZV), ο οποίος προκαλεί επίσης ανεμοβλογιά στην παιδική ηλικία. Σε μια συστηματική ανασκόπηση, ο Κατσίκας Τριανταφυλλίδης κ.ά. (2021) εντόπισε 91 περιπτώσεις έρπη ζωστήρα που εμφανίστηκαν κατά μέσο όρο 5,8 ημέρες μετά τον εμβολιασμό με mRNA. Αν και αναγνωρίζουμε ότι η αιτιότητα δεν έχει ακόμη επιβεβαιωθεί, «ο έρπης ζωστήρας είναι πιθανώς μια κατάσταση που οι γιατροί και άλλοι επαγγελματίες του τομέα της υγείας αναμένουν να δουν σε ασθενείς που λαμβάνουν εμβόλια για τον COVID-19» ( Κάτσικας Τριανταφυλλίδης et al., 2021 ). Σε επιστολή προς τον εκδότη που δημοσιεύτηκε στις 2 Σεπτεμβρίου 2021, οι Fathy et al. (2022) ανέφεραν 672 περιπτώσεις δερματικών αντιδράσεωνπου πιθανώς σχετίζονταν με το εμβόλιο, συμπεριλαμβανομένων 40 περιπτώσεων επανενεργοποίησης του έρπητα ζωστήρα ή/και του απλού έρπητα. Αυτά τα περιστατικά είχαν αναφερθεί στην Αμερικανική Ακαδημία Δερματολογίας και στο Μητρώο Δερματολογίας COVID-19 της Διεθνούς Ένωσης Δερματολογικών Εταιρειών, που δημιουργήθηκε ειδικά για την παρακολούθηση δερματολογικών επιπλοκών από τα εμβόλια. Υπάρχουν πολλές επιπλέον αναφορές περιστατικών επανενεργοποίησης του έρπητα ζωστήρα μετά από εμβολιασμό κατά του COVID-19 στη βιβλιογραφία ( Psichogiou et al., 2021b ; Iwanaga et al., 2021 ). Οι Lladó et al. (2021)σημείωσε ότι 51 από τις 52 αναφορές επανενεργοποιημένων λοιμώξεων από έρπη ζωστήρα συνέβησαν μετά από εμβολιασμό με mRNA. Ο ίδιος ο έρπης ζωστήρας παρεμβαίνει επίσης στη σηματοδότηση της IFN-α σε μολυσμένα κύτταρα τόσο μέσω της παρεμβολής στη φωσφορυλίωση STAT2 όσο και μέσω της διευκόλυνσης της αποικοδόμησης του IRF9 ( Verweij et al., 2015 ).

Αξιοσημείωτη είναι και μια επιπλέον περίπτωση επανενεργοποίησης του ιού. Αφορούσε μια 82χρονη γυναίκα που είχε αποκτήσει λοίμωξη από τον ιό της ηπατίτιδας C (HCV) το 2007. Μια ισχυρή αύξηση στο φορτίο HCV σημειώθηκε λίγες ημέρες μετά τον εμβολιασμό με εμβόλιο mRNA Pfizer/BioNTech, μαζί με εμφάνιση ίκτερου. Πέθανε τρεις εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό από ηπατική ανεπάρκεια ( Lensen et al., 2021 ).

10. Ανοσολογική θρομβοπενία

Η ανοσοθρομβοπενία είναι μια αυτοάνοση διαταραχή, όπου το ανοσοποιητικό σύστημα επιτίθεται στα κυκλοφορούντα αιμοπετάλια. Η ανοσοθρομβοπενική πορφύρα (ITP) έχει συσχετιστεί με αρκετούς εμβολιασμούς, συμπεριλαμβανομένων της ιλαράς , της παρωτίτιδας, της ερυθράς (MMR), της ηπατίτιδας Α, της ανεμευλογιάς , της διφθερίτιδας , του τετάνου , του κοκκύτη (DPT), της στοματικής πολιομυελίτιδας και της γρίπης ( Perricone et al., 2014 ). Ενώ υπάρχει ευρεία επίγνωση ότι τα εμβόλια που βασίζονται σε DNA αδενοϊού μπορούν να προκαλέσουν ανοσοθρομβωτική θρομβοπενία (VITT) που προκαλείται από εμβόλια (Kelton et al., 2021), τα εμβόλια mRNA δεν είναι χωρίς κίνδυνο για το VITT, καθώς έχουν δημοσιευτεί περιπτωσιολογικές μελέτες που τεκμηριώνουν τέτοια περιστατικά, συμπεριλαμβανομένης της απειλητικής για τη ζωή και της θανατηφόρου θρόμβωσης του εγκεφαλικού φλεβικού κόλπου ( Lee et al., 2021 ; Akiyama et al., 2021 ; Atoui et al. , 2022 , Zakaria et al., 2021 ). Ο μηχανισμός πιστεύεται ότι περιλαμβάνει αντισώματα VITT που συνδέονται με τον παράγοντα 4 των αιμοπεταλίων (PF4) και σχηματίζουν ανοσοσυμπλέγματα που επάγουν την ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων. Οι επακόλουθοι καταρράκτες πήξης προκαλούν το σχηματισμό διάχυτων μικροθρόμβων στον εγκέφαλο, τους πνεύμονες, το συκώτι, τα πόδια και αλλού, που σχετίζονται με μια δραματική πτώση στον αριθμό των αιμοπεταλίων ( Kelton et al., 2021). Η αντίδραση στο εμβόλιο έχει περιγραφεί ως πολύ παρόμοια με την επαγόμενη από την ηπαρίνη θρομβοπενία (HIT), με τη διαφορά ότι η χορήγηση ηπαρίνης δεν εμπλέκεται σημαντικά ( Cines and Bussel, 2021 ).

Έχει αποδειχθεί ότι τα εμβόλια mRNA προκαλούν κυρίως μια ανοσοαπόκριση ανοσοσφαιρίνης G (IgG), με λιγότερες ποσότητες IgA που προκαλούνται ( Wisnewski et al., 2021 ) και ακόμη λιγότερη παραγωγή IgM ( Danese et al., 2021 ). Η ποσότητα των αντισωμάτων IgG που παράγονται είναι συγκρίσιμη με την ανταπόκριση που παρατηρείται σε σοβαρές περιπτώσεις COVID-19. Είναι τα αντισώματα IgG σε σύμπλεγμα με ηπαρίνη που προκαλούν HIT. Κάποιος μπορεί να υποθέσει ότι το IgG που συμπλέκεται με τη γλυκοπρωτεΐνη ακίδας SARS-CoV-2 και το PF4 είναι το σύμπλεγμα που επάγει το VITT ως απόκριση στα εμβόλια mRNA. Στην πραγματικότητα, έχει αποδειχθεί πειραματικά ότι η περιοχή δέσμευσης υποδοχέα (RBD) της πρωτεΐνης ακίδας συνδέεται με το PF4 ( Passariello et al., 2021 ).

Ο υποκείμενος μηχανισμός πίσω από το HIT έχει μελετηθεί καλά, μεταξύ άλλων μέσω της χρήσης ανθρωποποιημένων μοντέλων ποντικιών. Είναι ενδιαφέρον ότι τα ανθρώπινα αιμοπετάλια, αλλά όχι τα αιμοπετάλια του ποντικού, εκφράζουν τον υποδοχέα FcγRIIA, ο οποίος αποκρίνεται στα σύμπλοκα PF4/ηπαρίνης/IgG μέσω ενός καταρράκτη φωσφορυλίωσης τυροσίνης για να επάγει την ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων. Κατά την ενεργοποίηση, τα αιμοπετάλια απελευθερώνουν κόκκους και δημιουργούν προπηκτικά μικροσωματίδια . Προσλαμβάνουν επίσης ασβέστιο, ενεργοποιούν την πρωτεϊνική κινάση C , συσσωματώνονται σε μικροθρόμβους και εκτοξεύουν έναν καταρράκτη κυτταρικού θανάτου μέσω καλπαΐνης δραστηριοποίηση. Αυτά τα ενεργοποιημένα αιμοπετάλια απελευθερώνουν το PF4 στον εξωκυτταρικό χώρο, υποστηρίζοντας έναν φαύλο κύκλο, καθώς αυτό το επιπλέον PF4 συνδέεται επίσης με την ηπαρίνη και το αντίσωμα IgG για να προωθήσει περαιτέρω την ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων. Έτσι, το FcγRIIA είναι κεντρικό στη διαδικασία της νόσου ( Nevzorova et al., 2019 ).

Μελέτες σε ποντίκια που κατασκευάστηκαν για να εκφράζουν τον ανθρώπινο υποδοχέα FcγRIIA έδειξαν ότι αυτά τα διαγονιδιακά ποντίκια